20-HETE诱导ROS生成加重心肌缺血再灌注损伤

论文摘要

20-羟二十烷四烯酸（20-HETE）是花生四烯酸经细胞色素P450s（CYP）ω-羟化酶的的代谢物。大鼠离体心脏缺血再灌注中20-HETE含量增多，抑制细胞色素（CYP450）ω-羟化酶作用—减少20-HETE的生成，会显著减少心肌梗死面积。这显示缺血再灌注引起的损伤可能被20-HETE所介导。我们实验室前期研究工作表明在乳鼠心肌细胞中20-HETE可激活PKC通路，由NADPH氧化酶衍生的ROS增多。因此，本研究皆在心脏离体缺血再灌中20-HETE对于心肌细胞内活性氧（ROS）的影响。方法及结果如下：⑴利用二氢溴化乙啶，在组织氧化损伤条件下检测胞内ROS，激光共聚焦软件测定药物处理前后产生红色荧光，发现20-HETE（30nM）与IR对照组相比ROS生成增加21±3.4%。⑵过量生成的ROS造成脂质过氧化，可能直接导致了心肌细胞凋亡。通过分光光度法测定心脏匀浆组织上清中MDA，以硫代巴比妥酸激活底物百分率表示。结果表明20-HETE（30nM）高于IR对照组20.18±4.4%。⑶在超氧阴离子生成过程中，在心肌细胞中主要表达Nox2是由NADPH到氧的最后电子传递体。因此，我们检测了NADPH氧化酶Nox2的mRNA表达，通过RT-PCR发现20-HETE（30nM）与IR对照组相比使心肌细胞中NADPH氧化酶Nox2亚基的mRNA表达分别提高了76.7±2.3%。综上，这些实验证据表明20-HETE加重心肌缺血再灌注后的损伤，可能与激活Nox2氧化酶进而导致其衍生的ROS增多有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 引言
• 1.2 0-羟二十烷四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic,20-HETE）
• 2.2 0-羟二十烷四烯酸在心肌缺血中的作用
• 3.活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）
• 材料和方法
• 1. 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 主要仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 心脏离体灌流
• 2.2 冰冻切片制备
• 2.3 心肌细胞中 ROS 测定
• 2.4 丙二醛（MDA）测定
• 2.5 Nox2 mRNA 水平检测
• 2.6 统计学处理方法
• 实验结果
• 1.2 0-HETE 增加了 IR 后 ROS 的生成
• 2.2 0-HETE 增加了 IR 后脂质过氧化的形成
• 3.心肌组织 Nox2 mRNA 表达
• 讨论
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 英文缩写
• 致谢