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露蜂房蛋白［NVP（1）］抑制HepG2细胞增殖的机制研究

2020-11-28阅读(445)

露蜂房蛋白［NVP（1）］抑制HepG2细胞增殖的机制研究

论文摘要

胡蜂亦称黄蜂,膜翅目（Hymenoptera）胡蜂科（Vespidae）胡蜂属（Polistes）,体乌黑发亮,有黄条纹和成对的斑点。胡蜂广泛分布在我国大部分山区,露蜂房为其巢,其中存在大量的抗癌活性物质。研究露蜂房蛋白质对抗癌细胞增殖的药物开发具有重要意义。但露蜂房蛋白质的种类较多,成分复杂,很难分离纯化出一个单一的蛋白质,目前国内外对其研究少有报道,本研究从露蜂房中分离出一个新的蛋白质,并深入地研究了其药理特性,完成的工作主要包括以下几个方面:1.利用双蒸水长时间4℃浸提,硫酸铵沉淀,0.22μm的滤膜透析脱盐,Sephdex-G50凝胶过滤,反相高效液相色谱层析等方法,从露蜂房中分离纯化出一种蛋白质,质谱分析其分子量为6.6 kD,并定义它为NVP（1）。2.研究了NVP（1）调节HepG2细胞的增殖机制。6.6μg/ml NVP（1）抑制HepG2细胞增殖作用发生在细胞周期的G1期,并且抑制cyclin B,cyclin D1和cyclin E mRNA的表达,NVP（1）也抑制了cdk2蛋白质的表达,但能增加p27,p21蛋白质的表达;此外,NVP（1）不能明显改变p16蛋白质的表达水平。通过细胞核染色质浓缩检测发现,NVP（1）可促进HepG2细胞凋亡。此外,NVP（1）激活了细胞外调节激酶（ERK）信号通路,当HepG2细胞提前用ERK的特异性抑制剂处理后,p-ERK蛋白质的表达量明显降低。这些结果表明,NVP（1）抑制HepG2细胞增殖是通过激活ERK信号通路,NVP（1）有可能成为肝癌治疗的一种潜在的药物。3.研究rSK3,rIK通道在细胞增殖中的作用。NVP（1）,能抑制Hek-293细胞增殖。Southern-blot检测转基因rSK3,rIK成功,转rSK3,rIK基因后,能消减NVP（1）抗细胞增殖的作用,rSK3,rIK促进细胞增殖。4.研究了NVP（1）对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制。用原代细胞培养,MTT法,流式细胞和免疫印迹检测细胞增殖。发现6.4×10-3g/L的NVP（1）可明显抑制支气管平滑肌细胞增殖,并且阻断在细胞周期的G1期,对照组G1期为64.6%,而NVP（1）处理组为90.5%。NVP（1）能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂（p21）蛋白质的表达,降低细胞周期蛋白激酶（cdk2）蛋白质的表达。NVP（1）阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G1期。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 绪论
  • 1.1 细胞周期和信号转导
  • 1.1.1 线粒体凋亡途径
  • 1.1.2 Fas途径
  • 1.1.3 ERK/MAPK信号途径
  • 1.1.4 PI3-K/AKT信号转导途径
  • 1.2 SK通道与细胞增殖
  • 1.3 肿瘤药物治疗的研究进展
  • 1.4 植物药的抗癌作用研究
  • 1.5 露蜂房抗癌的研究进展
  • 1.6 蛋白质的分离纯化
  • 1.6.1 蛋白质的纯度鉴定
  • 1.6.2 蛋白质的序列鉴定
  • 1.7 本文的目的意义及研究内容
  • 2 露蜂房蛋白质的分离纯化及鉴定
  • 2.1 前言
  • 2.2 材料与方法
  • 2.2.1 材料
  • 2.2.2 方法
  • 2.3 结果
  • 2.4 讨论
  • 2.5 本章小结
  • 3 NVP（1）抑制肝癌HepG2细胞增殖机制研究
  • 3.1 前言
  • 3.2 材料和方法
  • 3.2.1 材料
  • 3.2.2 方法
  • 3.3 结果
  • 50)'>3.3.1 检测NVP（1）的分子量,测定NVP（1）抑制肝癌细胞HepG2增殖的半数有效量(IC50)
  • 3.3.2 NVP（1）抑制肝癌细胞HepG2细胞周期阻断在G1期
  • 3.3.3 NVP（1）诱导肝癌细胞HepG2细胞凋亡
  • 3.3.4 NVP（1）减少cyclins（B,E and D1）mRNA的表达水平
  • 3.3.5 NVP（1）影响cdk和cdkⅠ的表达
  • 3.3.6 NVP（1）抑制肝癌细胞HepG2细胞增殖通过ERK信号通路
  • 3.3.7 MEK1/2抑制剂阻断p-ERK的激活
  • 3.4 讨论
  • 3.5 本章小结
  • 4 NVP（1）减弱低电导的钙离子激活的钾通道（SK）的表达
  • 4.1 前言
  • 4.2 实验材料与方法
  • 4.2.1 材料
  • 4.2.2 方法
  • 4.3 结果
  • 4.3.1 原代培养五种平滑肌并检测SK基因,转染PEGFP-N1
  • 4.3.2 探针标记,DNA酶切,Southern-blotting检测
  • 4.3.3 NVP（1）诱导Hek-293细胞死亡的形态学变化
  • 4.3.4 细胞计数
  • 4.4 讨论
  • 4.5 本章小结
  • 5 NVP（1）抑制支气管平滑肌细胞增殖于G1期
  • 5.1 前言
  • 5.2 材料与方法
  • 5.2.1 材料
  • 5.2.2 方法
  • 5.3 结果
  • 5.3.1 NVP（1）抑制支气管平滑肌细胞增殖
  • 5.3.2 NVP（1）影响支气管平滑肌细胞周期
  • 5.3.3 NVP（1）减弱Cdk2蛋白的表达,增强p21蛋白的表达
  • 5.4 讨论
  • 5.5 本章小结
  • 6 全文总结
  • 6.1 本文的特色和创新之处
  • 6.2 有待继续开展的工作
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录1 攻读学位期间发表论文目录
  • 附录2 ABBREVIATIONS

    • 相关论文文献

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