辽宁省阜新市药品检验所123000
【中图分类号】Ｒ284.1【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2016）6
[摘要]目的：通过实验建立抗热镇痉丸中的绿原酸含量测定方法。方法：使用HPLC法测定抗热镇痉丸中的绿原酸含量，进行方法考察。结果：在选定的色谱条件下,供试溶液中绿原酸与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定,3批样品中绿原酸含量分别为0.44、0.47、0.46mg/丸。结论:采用HPLC法可以作为抗热镇痉丸中绿原酸的含量测定方法。
[关键词]高效液相色谱；抗热镇痉丸；绿原酸；含量测定
抗热镇痉丸是以十一味药物，除鲜地黄、鲜石菖蒲、淡豆豉外，其余天花粉等八味粉碎成细粉，过筛，混匀；鲜地黄、鲜石菖蒲压榨取汁，滤过；淡豆豉粉碎成细粉，制成稀糊，加入上述滤汁，混匀；与为粉末制成丸，低温干燥，即得。其具有清热解毒之功效。临床上用于湿温暑疫，高热不退，痉阙昏狂，谵语发斑等疾病的治疗。本次研究主要是通过实验建立抗热镇痉丸中的绿原酸含量测定方法。方法如下所示。
1仪器与试剂
仪器:液相色谱仪（日本岛津LC-10AT,SPD-10AV检测器)，色谱柱：（InertSustain-C18柱(4.6mmX150mm,5μm)）试剂:乙腈为色谱纯,其它为分析纯。
2实验用品
绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：:110753-201314）；流动相所用乙腈为北京四友化学试剂厂色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。抗热镇痉丸（批号:20150212，20150524,20150715），厂家：菏泽生物制药厂）。
2实验方法
2.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅胶键合相硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）为流动相；柱温：30℃；检测波长为327nm，理论板数按绿原酸峰计应不低于4000[1]。
2.2对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
2.3供试品溶液的制备
取本品10丸，取约1g，精密称定，置100mL量瓶中，加入甲醇约80mL，超声处理10min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，离心（2000r/min）5min，取上清液至棕色量瓶中，即得[2]。
2.4测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.5阴性干扰试验
取除去金银花提取物以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液[3]。
2.6线性范围考察
精密称取绿原酸对照品8.62mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇溶解，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含0.0862mg的溶液，分别精密吸取2、4、6、8、10mL溶液置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别取上述5种溶液10μL，注入液相色谱器仪中，测定色谱峰面积[4]。结果得出，以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,回归方程为:Y=1441233X+8639.5,r=0.9999。由测定结果提示,绿原酸进样量在0.1788-0.8626μg范围内线性关系良好。
2.7精密度试验
精密吸取同一对照品溶液20μl，连续进样5次，分别测得峰面积，RSD=0.5%。
2.8稳定性试验
精密吸取上述供试品溶液20μl，于2h、4h、6h、8h、10h后测定峰面积的RSD=0.8%，表明供试品溶液至少在10h内稳定。
2.9加样回收率试验
取已测知含量的样品(绿原酸含量为0.45mg/丸)适量研细，分别取约1g，共6份，精密称定，分别精密加入三个不同浓度的对照品溶液(浓度为:0.3957mg/mL、0.2455mg/mL、0.1323mg/mL)5mI及甲醇45mL测定含量，所得加样回收率RSD=0.3%、0.5%、0.3%）
2.10重复性试验
精密量取同一样品5份，照上述操作，结果得绿原酸峰面积的RSD为0.60%。n=5表明本法重复性好。
3含量测定结果
在选定的色谱条件下,供试溶液中绿原酸与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定,3批样品中绿原酸含量分别为0.44、0.47、0.46mg/丸。
3讨论
本次研究主要是探讨通过实验建立抗热镇痉丸中的绿原酸含量测定方法。在乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）为流动相；柱温：30℃；检测波长为327nm的条件下，所测定的3批样品中绿原酸含量分别为0.44、0.47、0.46mg/丸。该方法简单，准确，重复性好。
由于绿原酸不稳定,在绿原酸对照品溶液及供试品溶液的配制时,应注意避光,宜采用棕色瓶。对照品溶液新配制,以免测定结果不准确。
参考文献
[1]陈绍华.土亚琴.罗立新.天然产物绿原酸的研究进展[J].食品利技.2008.33(2):195-199.
[2]吴卫华.康祯.欧阳东生.等.绿原酸的药理学研究进展[J].天然产物研究与开发.2006(18):691.
[3]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京.中国医药利技出版社.2010:205.
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[5]刘彬果.任涛.土媛.用HPLC法测定急扁颗粒中绿原酸和连翘营的含量[J].药学服务与研究,2015,15(3):193.