论文摘要
目的:现代医学研究认为缺血再灌注损伤是大多数急性缺血性疾病的主要病理生理过程,而细胞凋亡则是器官、组织缺血再灌注损伤过程中细胞死亡的重要机制之一,因此干预细胞凋亡,从而防治缺血再灌注损伤已经引起国内外广泛关注。在缺血后的不同时间,细胞内有多种反应性基因先后表达,其中P53基因作为转录因子,通过激活一系列下游基因发挥促凋亡作用。caspase-3的表达介导脑缺血后迟发性神经细胞死亡及神经细胞发生凋亡。丹星通络汤由丹参、胆南星、三七等具有清热化痰、活血通络作用的药物组成,在临床上对缺血性脑血管病的治疗有很好的效果,前期实验表明丹星通络汤可以降低脑缺血再灌注大鼠的一氧化氮（NO）含量、增加超氧化物歧化酶（SOD）含量,通过上调反义核酸（Bcl一2）蛋白表达而减少大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡。本实验通过观察丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织中P53、caspase-3的表达及血清中LDH含量的影响,进一步探讨星通络汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法: 40只健康雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶脑缺血再灌注大鼠模型,并随机将大鼠分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（ I/ R）、丹星通络汤大,小剂量组和尼莫地平组,每组8只。丹星通络汤组分别按15ml/kg（大剂量）, 7.5ml/kg（小剂量）,尼莫地平组10g/kg,术前连续灌胃给药7d,每天一次。假手术组和缺血再灌组分别灌以7.5ml/kg的生理盐水。大鼠局灶性脑缺血2 h ,然后进行再灌注。在再灌注24 h断头取脑组织,采用免疫组织化学法检测脑组织中Caspase-3及P53的表达;HE染色观察各组大鼠脑组织形态学变化;分光比色法测血清中乳酸脱氢酶（LDH）的含量。结果:1.组织形态学观察假手术组细胞结构正常;模型组脑组织中均见神经细胞结构模糊,胞体肿胀,尼氏小体减少或消失,出现不同程度的核深染、核固缩、核溶解,核体不规则,有明显软化灶形成,周边可见中性粒细胞浸润;中药组和尼莫地平组神经细胞排列略紊乱,仍可见细胞皱缩和胞核固缩浓染现象,但程度较模型明显减轻;其中以中药大剂量、尼莫地平组尤为显著。2.丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠caspase-3、P53蛋白表达的影响假手术组偶见caspase-3阳性细胞,蛋白表达微弱;脑缺血2h再灌注24h后, caspase-3、P53阳性细胞假手术组明显增强;与模型组相比,各治疗组caspase-3、p53阳性细胞数均降低;与丹星通络汤小剂量组相比,尼莫地平组、丹星通络汤大剂量组caspase-3阳性细胞数明显降低,但这两组之间无明显差异,无统计学意义。3.血清中LDH值模型组血清LDH值均显著高于假手术组（P < 0.05）;治疗组LDH值虽高于假手术组但均显著低于模型组（P < 0.05）。结论:丹星通络汤可能通过降低LDH的含量脑缺血再灌注损伤起到保护作用。通过抑制caspase-3、p53蛋白的表达而使细胞的凋亡受抑制,从而对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。