本文主要研究内容
作者娄欣宇（2019）在《鱼精蛋白增强大肠杆菌疫苗诱导早期免疫保护的研究》一文中研究指出：致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)可感染人和其他多种动物,新生和幼龄动物更为易感,临床上多表现为急性传染病。当前,致病性大肠杆菌已对大部分抗菌药物产生耐药性,给药物防治E.coli感染带来很大困难。现阶段养殖场防控大肠杆菌病主要依靠疫苗接种,但现有的疫苗存在副作用大,诱导免疫保护慢,以及免疫效果不理想等问题。因此,通过添加佐剂来提高E.coli疫苗的免疫效力具有重要临床意义。鱼精蛋白(Protamine protein,PP)是一种主要存在于鱼类成熟精子细胞核中的碱性蛋白质,广泛应用于心脏手术、抗血栓、抗肿瘤、食品防腐和抗原载体等方面。本实验室前期研究证明,PP能极显著地增强E.coli疫苗诱导的早期体液免疫反应和免疫保护,具有良好的临床应用潜力。为了进一步探讨PP增强E.coli的佐剂作用及其机制,本文从以下四部分展开试验探究。1.研究PP对E.coli疫苗免疫效力的增强作用方法:24只雌性ICR小鼠随机分为3组,分别皮下注射E.coli灭活疫苗(1×10~7 CFU/只)(下同)、PP(100μg)+E.coli灭活疫苗和生理盐水。3d后对所有试验小鼠腹腔注射致死剂量E.coli菌液(含活菌1×10~7 CFU),记录发病情况及死亡率。结果:PP作为佐剂与E.coli疫苗联合免疫小鼠,使小鼠存活率从12.5%提高至87.5%,显著提高了疫苗诱导的早期免疫保护作用。2.研究PP增强E.coli灭活疫苗诱导早期免疫保护的机制方法:32只雌性ICR小鼠随机分为4组,分别皮下注射E.coli灭活疫苗、铝胶(200μg)+E.coli灭活疫苗、PP(100μg)+E.coli灭活疫苗和生理盐水。3d后对所有小鼠腹腔注射亚剂量E.coli菌液(含活菌2×10~6 CFU),记录发病情况及死亡率,并检测免疫后48h特异性抗体水平,攻毒后血液细菌含量和血常规。结果:PP组攻毒保护率为100%,与空白组(50%),铝胶组(25%)和对照组(37.5%)存在极显著差异(P<0.01)。免疫后48h,PP即可诱导机体产生相对较高的特异性IgM、IgG抗体水平。在攻毒后可以促进机体对细菌的清除作用(P<0.05),提高血液循环中PLT的数量(P<0.01),缓解WBC、LYM~#及GRAN~#的减少(P<0.05)。表明PP作为佐剂在E.coli疫苗免疫后2d即可激活机体的早期免疫应答,推测是通过增强固有免疫功能和快速产生较高水平的特异性抗体来增强机体对E.coli攻毒的保护力。3.研究PP的抗大肠杆菌攻毒作用与TLR4信号通路的关系方法:(1)选取雌性ICR小鼠进行试验,皮下注射PP(100μg)或生理盐水。7d后分别腹腔注射致死剂量和亚致死剂量的E.coli菌液,记录致死剂量攻毒后48h的发病情况和死亡率,检测亚致死剂量攻毒后小鼠血液LPS浓度,血液ALT浓度以及炎症因子表达水平,另取8只未经处理的小鼠,处死后取样作为空白组。(2)24只雌性ICR小鼠随机分为2组,分别皮下注射PP(100μg)和生理盐水。于给药后2d、7d每组各取一半小鼠处死,检测PP对TLR4通路相关的细胞因子mRNA转录的影响。结果:(1)PP单独注射(7d)能使小鼠存活率从0%提高至80%,表明PP有明显的抵抗E.coli侵袭的作用。PP可以降低E.coli攻毒后小鼠血液LPS浓度和ALT浓度,下调TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、IRF7、IFN-β等因子的mRNA转录水平,推测PP对MyD88依赖和TRIF依赖两条TLR4信号通路启动途径均具有一定的抑制作用,避免机体发生早期急性感染时其炎症反应的过度发展和免疫紊乱的发生。(2)PP单独注射7d后,可检测到TLR4、IFN-β、IL-6的mRNA转录水平出现一定程度的上调,推测PP可能通过事先轻度促进机体的炎症反应来增强对E.coli的抵抗力。4.研究PP增强E.coli疫苗诱导家兔早期免疫保护作用方法:将12只家兔随机分为2组,分别皮下注射E.coli灭活疫苗(3×10~7 CFU/只)和PP(100μg)+E.coli灭活疫苗。7d后对其皮下注射E.coli菌液0.6mL(含活菌3×10~7 CFU),记录发病情况及死亡率。另取6只未经处理的家兔作为空白组,一同检测血常规、血液LPS含量和血生化。结果:PP联合E.coli灭活疫苗免疫家兔能够使血液PLT和WBC数量有一定程度提高;与对照组相比,攻毒后PP组能极显著降低攻毒所致的LPS、ALT和AST的升高,缓解攻毒所致的PLT、WBC数量的下降。表明PP作为佐剂与E.coli疫苗联合免疫家兔,可以有效增强其免疫效力。综上所述,PP作为E.coli疫苗佐剂,可以快速激活机体早期免疫反应和免疫保护。机理研究表明,PP具有一定的免疫调节作用,它能快速增强小鼠对E.coli的抵抗力,这可能与调控LPS-TLR4信号通路相关炎症因子表达相关。因此,PP作为大肠杆菌疫苗候选佐剂,具备潜在的临床应用价值。
Abstract
zhi bing xing da chang gan jun (Escherichia coli,E.coli)ke gan ran ren he ji ta duo chong dong wu ,xin sheng he you ling dong wu geng wei yi gan ,lin chuang shang duo biao xian wei ji xing chuan ran bing 。dang qian ,zhi bing xing da chang gan jun yi dui da bu fen kang jun yao wu chan sheng nai yao xing ,gei yao wu fang zhi E.coligan ran dai lai hen da kun nan 。xian jie duan yang shi chang fang kong da chang gan jun bing zhu yao yi kao yi miao jie chong ,dan xian you de yi miao cun zai fu zuo yong da ,you dao mian yi bao hu man ,yi ji mian yi xiao guo bu li xiang deng wen ti 。yin ci ,tong guo tian jia zuo ji lai di gao E.coliyi miao de mian yi xiao li ju you chong yao lin chuang yi yi 。yu jing dan bai (Protamine protein,PP)shi yi chong zhu yao cun zai yu yu lei cheng shou jing zi xi bao he zhong de jian xing dan bai zhi ,an fan ying yong yu xin zang shou shu 、kang xie shuan 、kang zhong liu 、shi pin fang fu he kang yuan zai ti deng fang mian 。ben shi yan shi qian ji yan jiu zheng ming ,PPneng ji xian zhe de zeng jiang E.coliyi miao you dao de zao ji ti ye mian yi fan ying he mian yi bao hu ,ju you liang hao de lin chuang ying yong qian li 。wei le jin yi bu tan tao PPzeng jiang E.colide zuo ji zuo yong ji ji ji zhi ,ben wen cong yi xia si bu fen zhan kai shi yan tan jiu 。1.yan jiu PPdui E.coliyi miao mian yi xiao li de zeng jiang zuo yong fang fa :24zhi ci xing ICRxiao shu sui ji fen wei 3zu ,fen bie pi xia zhu she E.colimie huo yi miao (1×10~7 CFU/zhi )(xia tong )、PP(100μg)+E.colimie huo yi miao he sheng li yan shui 。3dhou dui suo you shi yan xiao shu fu qiang zhu she zhi si ji liang E.colijun ye (han huo jun 1×10~7 CFU),ji lu fa bing qing kuang ji si wang lv 。jie guo :PPzuo wei zuo ji yu E.coliyi miao lian ge mian yi xiao shu ,shi xiao shu cun huo lv cong 12.5%di gao zhi 87.5%,xian zhe di gao le yi miao you dao de zao ji mian yi bao hu zuo yong 。2.yan jiu PPzeng jiang E.colimie huo yi miao you dao zao ji mian yi bao hu de ji zhi fang fa :32zhi ci xing ICRxiao shu sui ji fen wei 4zu ,fen bie pi xia zhu she E.colimie huo yi miao 、lv jiao (200μg)+E.colimie huo yi miao 、PP(100μg)+E.colimie huo yi miao he sheng li yan shui 。3dhou dui suo you xiao shu fu qiang zhu she ya ji liang E.colijun ye (han huo jun 2×10~6 CFU),ji lu fa bing qing kuang ji si wang lv ,bing jian ce mian yi hou 48hte yi xing kang ti shui ping ,gong du hou xie ye xi jun han liang he xie chang gui 。jie guo :PPzu gong du bao hu lv wei 100%,yu kong bai zu (50%),lv jiao zu (25%)he dui zhao zu (37.5%)cun zai ji xian zhe cha yi (P<0.01)。mian yi hou 48h,PPji ke you dao ji ti chan sheng xiang dui jiao gao de te yi xing IgM、IgGkang ti shui ping 。zai gong du hou ke yi cu jin ji ti dui xi jun de qing chu zuo yong (P<0.05),di gao xie ye xun huan zhong PLTde shu liang (P<0.01),huan jie WBC、LYM~#ji GRAN~#de jian shao (P<0.05)。biao ming PPzuo wei zuo ji zai E.coliyi miao mian yi hou 2dji ke ji huo ji ti de zao ji mian yi ying da ,tui ce shi tong guo zeng jiang gu you mian yi gong neng he kuai su chan sheng jiao gao shui ping de te yi xing kang ti lai zeng jiang ji ti dui E.coligong du de bao hu li 。3.yan jiu PPde kang da chang gan jun gong du zuo yong yu TLR4xin hao tong lu de guan ji fang fa :(1)shua qu ci xing ICRxiao shu jin hang shi yan ,pi xia zhu she PP(100μg)huo sheng li yan shui 。7dhou fen bie fu qiang zhu she zhi si ji liang he ya zhi si ji liang de E.colijun ye ,ji lu zhi si ji liang gong du hou 48hde fa bing qing kuang he si wang lv ,jian ce ya zhi si ji liang gong du hou xiao shu xie ye LPSnong du ,xie ye ALTnong du yi ji yan zheng yin zi biao da shui ping ,ling qu 8zhi wei jing chu li de xiao shu ,chu si hou qu yang zuo wei kong bai zu 。(2)24zhi ci xing ICRxiao shu sui ji fen wei 2zu ,fen bie pi xia zhu she PP(100μg)he sheng li yan shui 。yu gei yao hou 2d、7dmei zu ge qu yi ban xiao shu chu si ,jian ce PPdui TLR4tong lu xiang guan de xi bao yin zi mRNAzhuai lu de ying xiang 。jie guo :(1)PPchan du zhu she (7d)neng shi xiao shu cun huo lv cong 0%di gao zhi 80%,biao ming PPyou ming xian de di kang E.coliqin xi de zuo yong 。PPke yi jiang di E.coligong du hou xiao shu xie ye LPSnong du he ALTnong du ,xia diao TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、IRF7、IFN-βdeng yin zi de mRNAzhuai lu shui ping ,tui ce PPdui MyD88yi lai he TRIFyi lai liang tiao TLR4xin hao tong lu qi dong tu jing jun ju you yi ding de yi zhi zuo yong ,bi mian ji ti fa sheng zao ji ji xing gan ran shi ji yan zheng fan ying de guo du fa zhan he mian yi wen luan de fa sheng 。(2)PPchan du zhu she 7dhou ,ke jian ce dao TLR4、IFN-β、IL-6de mRNAzhuai lu shui ping chu xian yi ding cheng du de shang diao ,tui ce PPke neng tong guo shi xian qing du cu jin ji ti de yan zheng fan ying lai zeng jiang dui E.colide di kang li 。4.yan jiu PPzeng jiang E.coliyi miao you dao jia tu zao ji mian yi bao hu zuo yong fang fa :jiang 12zhi jia tu sui ji fen wei 2zu ,fen bie pi xia zhu she E.colimie huo yi miao (3×10~7 CFU/zhi )he PP(100μg)+E.colimie huo yi miao 。7dhou dui ji pi xia zhu she E.colijun ye 0.6mL(han huo jun 3×10~7 CFU),ji lu fa bing qing kuang ji si wang lv 。ling qu 6zhi wei jing chu li de jia tu zuo wei kong bai zu ,yi tong jian ce xie chang gui 、xie ye LPShan liang he xie sheng hua 。jie guo :PPlian ge E.colimie huo yi miao mian yi jia tu neng gou shi xie ye PLThe WBCshu liang you yi ding cheng du di gao ;yu dui zhao zu xiang bi ,gong du hou PPzu neng ji xian zhe jiang di gong du suo zhi de LPS、ALThe ASTde sheng gao ,huan jie gong du suo zhi de PLT、WBCshu liang de xia jiang 。biao ming PPzuo wei zuo ji yu E.coliyi miao lian ge mian yi jia tu ,ke yi you xiao zeng jiang ji mian yi xiao li 。zeng shang suo shu ,PPzuo wei E.coliyi miao zuo ji ,ke yi kuai su ji huo ji ti zao ji mian yi fan ying he mian yi bao hu 。ji li yan jiu biao ming ,PPju you yi ding de mian yi diao jie zuo yong ,ta neng kuai su zeng jiang xiao shu dui E.colide di kang li ,zhe ke neng yu diao kong LPS-TLR4xin hao tong lu xiang guan yan zheng yin zi biao da xiang guan 。yin ci ,PPzuo wei da chang gan jun yi miao hou shua zuo ji ,ju bei qian zai de lin chuang ying yong jia zhi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自福建农林大学的娄欣宇，发表于刊物福建农林大学2019-08-30论文，是一篇关于大肠杆菌论文,鱼精蛋白论文,佐剂论文,早期免疫论文,福建农林大学2019-08-30论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自福建农林大学2019-08-30论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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