RBP4，RARG，MYOG基因多态性及其与猪繁殖性能关系的研究

论文摘要

猪的产仔数是低遗传力性状（h2=0.1）,用传统方法选育效果很不理想。随着分子遗传学理论与技术的发展,人们对主效基因或遗传标记在低遗传力性状遗传改良上的作用寄予厚望。从二十世纪八十年代起,已经发现了多个与产仔数性状有关的候选基因,为繁殖性状的标记辅助选择提供了条件。维生素A对于促进精子和卵子产生、胎盘发育、胎儿生长与发育是必需的。它可提高胚胎直径的整齐度和胚胎发育的同步性,从而降低早期胚胎的死亡率,也可提高仔猪初生均匀度。维生素A还能够调节血液内孕酮的含量,从而影响母猪的繁殖性能。肌纤维是构成骨骼肌的基本单位,其生成仅限于胚胎期,在猪胚胎期70天左右即已形成,因此胚胎期肌纤维的发育可影响仔猪初生窝重和仔猪初生均匀度。本试验选择能够影响维生素A转运的视黄醇结合蛋白4（RBP4）基因和视黄酸受体γ（RARG）基因及影响肌纤维生成的肌细胞生成素（MYOG）基因作为候选基因,以繁殖性能差别较大的民猪群体、长白群体、大白群体、杜洛克群体和部分杂种猪（共计458头）为试验群体,采用测序结合PCR-RFLP和PCR-SSCP的方法,重点检测了这些基因编码区的单核苷酸度多态性（SNPs）,并分析了这些基因位点基因型频率在不同群体间的分布以及不同基因型与群体繁殖性能的关系。主要研究结果如下:（1）RBP4基因MSPⅠ多态位点的基因型频率和等位基因频率在不同群体间的分布差异极显著。MSPⅠ位点为AA基因型的民猪母猪的产仔数、21日龄仔猪数、断奶仔猪数显著高于BB型民猪。综合其它研究得到的结果可以认为,MSPⅠ位点的AA基因型是民猪母猪产仔数的有利基因型。（2）本研究首次在RARG基因内含子3上检测到一个多态位点,该位点是由碱基A→G突变造成的。该多态位点的基因型频率和等位基因频率在不同群体间的分布差异极显著。在民猪群体中,AA基因型母猪的21日龄仔猪均匀度和断奶仔猪均匀度显著高于BB基因型母猪;在大白猪群体中,AA基因型母猪产活仔数和仔猪初生活仔窝重显著高于BB型母猪,该位点的AA基因型大白群体产活仔数的有利基因型,但对其它试验群体母猪的产仔数并无明显影响,因此并不能判断该位点对母猪产仔数的影响。（3）RBP4基因MSPⅠ位点和RARG基因内含子3位点BBBB合并基因型在不同群体中基因型频率最低。RBP4基因和RARG基因不同合并基因型对民猪群体、长白猪群体和大白猪群体的多个繁殖性状有显著影响,但作用无明显规律,表明两基因间存在着极其复杂的互作关系。（4）MYOG基因内含子2多态位点、3’端多态位点和5’端多态位点基因型频率和等位基因频率在不同群体中分布差异不显著。内含子2多态位点AA基因型民猪母猪的21日龄仔猪数和断奶仔猪数显著高于AB型和BB型母猪,AA型和BB型母猪的21日龄仔猪窝重显著高于AB型母猪,在长白群体中,AA型母猪的总产仔数和产活仔数显著少于BB型母猪。在大白群体中,BB基因型的母猪的总产仔数、产活仔数和21日龄仔猪数显著高于AA型母猪,但AA型母猪的仔猪初生均匀度显著高于AB型和BB型母猪,综合长白猪和大白猪研究及其它研究结果,可以认为BB基因型是产仔数的有利基因型;3’端多态位点在长白群体中,AA型母猪的初生窝重显著高于BB型母猪。在大白群体中,AA基因型母猪的初生窝重显著高于BB型母猪。在杜洛克群体中,AA型母猪的产活仔数显著高于BB型母猪。在长民猪群体中,AA型母猪的仔猪初生均匀度显著高于BB型母猪,研究结果表明AA基因型是仔猪初生窝重的有利基因型;5’端多态位点AA型民猪的总产仔数显著高于BB型母猪,但没有发现该位点对其它试验群体繁殖性能的影响,因此应做进一步的研究来确定该基因位点对猪繁殖性能的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 研究背景与科学意义
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 影响母猪繁殖性能的因素
• 1.2.2 猪繁殖性状的选择方法与效果
• 1.2.3 猪繁殖性状候选基因的研究进展
• 1.3 研究的目标与内容
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物和性状测定
• 2.1.2 药品和试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 缓冲液与常用试剂的配制
• 2.2.2 耳组织样DNA 的提取
• 2.2.3 DNA 浓度和质量的检测
• 2.2.4 引物的设计与合成
• 2.2.5 DNA 片段的克隆测序
• 2.2.6 PCR 扩增
• 2.2.7 PCR-SSCP 检测
• 2.2.8 PCR-RFLP 检测
• 2.2.9 基因型的判定
• 2.2.10 统计模型的建立
• 3 结果与分析
• 3.1 RBP4 基因的多态性及其与繁殖性能的相关分析
• 3.1.1 RBP4 基因MSPⅠ位点的PCR-RFLP 分析
• 3.1.2 RBP4 基因外显子6 的SNPs 分析
• 3.1.3 不同群体RBP4 基因MSPⅠ位点的基因型频率和等位基因频率
• 3.1.4 RBP4 基因的SNPs 与猪繁殖性能的最小二乘分析
• 3.2 猪RARG 基因多态性及其与繁殖性能的相关分析
• 3.2.1 猪RARG 基因内含子3SNPs 分析
• 3.2.2 猪RARG 基因外显子5 的SNPs 分析
• 3.2.3 不同群体RARG 基因内含子3 位点基因型频率和等位基因频率
• 3.2.4 RARG 基因内含子3 多态性与猪繁殖性能的最小二乘分析
• 3.3 猪RBP4 基因和RARG 基因多态位点合并基因型分析
• 3.4 猪MYOG 基因的多态性及其与繁殖性能的相关分析
• 3.4.1 猪MYOG 基因内含子2 的SNP 分析
• 3.4.2 猪MYOG 基因3’端侧翼序列的SNPs 分析
• 3.4.3 猪MYOG 基因5’端侧翼序列的SNPs 分析
• 4 讨论
• 4.1 猪RBP4 基因多态性及其与繁殖性能的关系
• 4.1.1 猪RBP4 基因基因型频率在不同群体间的分布
• 4.1.2 猪RBP4 基因MSPⅠ位点不同基因型与繁殖性状的关系
• 4.2 猪RARG 基因多态性及其与繁殖性能的关系
• 4.2.1 猪RARG 基因基因型频率在不同群体间的分布
• 4.4.2 猪RARG 基因内含子3 的基因型与繁殖性状的关系
• 4.3 猪RBP4 基因和RARG 基因合并基因型与繁殖性能的关系
• 4.4 猪MYOG 基因多态性及其与繁殖性能的关系
• 4.4.1 猪MYOG 基因基因型频率在不同群体间的分布
• 4.4.2 猪MYOG 基因的基因型与繁殖性状的关系
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文