盐酸青藤碱对Wistar大鼠EAE的防治作用及机制探讨

论文摘要

目的：观察盐酸青藤碱对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）模型的临床表现、病理改变及炎症因子表达的影响，并探讨其对EAE的预防治疗作用及可能机制，为临床应用治疗MS提供基础实验依据。方法：（1）模型制备：用豚鼠脊髓匀浆（guinea pig spinal cord homogenate，GP-SCH）+完全福氏佐剂（complete freund’s adguvant，CFA）+百日咳疫苗（pertussis vaccine，PV）原浆液免疫雌性6～8周龄Wistar大鼠，建立EAE发病模型。（2）实验动物分组：50只Wistar大鼠随机分成EAE组、盐酸青藤碱组（100mg／kg）、激素干预组（5mg／kg）和空白对照组，前三组各15只，空白对照组5只。（3）发病大鼠处理：分别于EAE发病初期（第11天）、发病高峰期（第15天）、发病缓解期（第21天）取发病动物脑部和脊髓制成标本。进行常规HE染色和LFB髓鞘染色，光镜下观察其病理变化。用免疫组化法检测各组发病大鼠大脑标本切片中IFN-γ、IL-12的表达情况。（4）实验结果处理：所有实验数据用SPSS11.5软件包进行统计学分析。结果：（1）各组大鼠发病情况及神经功能评分：EAE组大鼠免疫后第11天开始发病，第15达高峰，第21天疾病缓解，发病表现为：体重减轻、抬尾无力、肢体瘫痪、甚至呈濒死状态。盐酸青藤碱组、激素组的大鼠发病时间较EAE组平均延后2天，发病大鼠临床表现与EAE组类同，但病情程度较EAE组轻。EAE组高峰期神经功能评分明显高于两干预组（P＜0.05）。（2）各组大鼠发病率及病理改变观察：EAE组临床发病14只，发病率93.3％，青藤碱组发病6只，发病率40％，激素组仅7只发病，发病率46.67％，空白对照组未有大鼠发病。EAE组发病率明显高于两干预组（P＜0.05），两干预组间无明显差别（P＞0.05）。各组发病高峰可见明显的炎性细胞浸润、“血管袖套”等病理改变。其中EAE组炎性病灶数明显多于两干预组（P＜0.05）。在EAE组大鼠LFB染色片上可见脱髓鞘改变。（3）．各组免疫组化检测结果：IFN-γ、IL-12在EAE组、两干预组发病各期均有表达，其表达水平与EAE病情程度一致，高峰期明显高于发病初期与缓解期（P＜0.05），EAE组高峰期内IFN-γ、IL-12的表达明显高于两干预组和空白对照组（P＜0.05）。结论：（1）IFN-γ、IL-12的表达水平与EAE病情的严重程度呈正相关，即随着病情的加重而升高，随着病情的缓解而下降。从而，推测IFN-γ、IL-12在EAE发病中可能起促进炎症发展的作用。（2）盐酸青藤碱可在一定程度上有效地干预大鼠EAE发病，缓解病情发展。其机制可能与减少促炎因子IFN-γ、IL-12的分泌，调节Th1／Th2细胞因子的平衡有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验动物和仪器
• 2.2 实验步骤和方法
• 2.3 HE 染色
• 2.4 Luxol Fast Blue（LFB） 髓鞘染色
• 2.5 免疫组织化学测定 INF-γIL-12 的表达
• 2.6 结果观察
• 2.7 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 各组大鼠发病表现及病程特点
• 3.2 各组大鼠发病率及结果比较
• 3.3 各组大鼠发病神经功能评分结果及比较
• 3.4 病理观察结果
• 3.5 免疫组化检验结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 致谢