导读:本文包含了泛素蛋白酶体抑制剂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:泛素-蛋白酶体通路,泛素-蛋白酶体抑制剂,肺成纤维细胞,转化生长因子β1
泛素蛋白酶体抑制剂论文文献综述
曹述任[1]（2015）在《泛素—蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化的影响及分子机制研究》一文中研究指出研究背景肺纤维化是已知或未知病因的具有相似病理过程的一组弥漫性肺疾病的共同病理改变。其病理特征主要表现为肺间质/肺泡炎性细胞的浸润,成纤维细胞的过度增殖、活化,细胞外基质成分的大量合成、沉积等而致使正常肺组织的结构改变及功能丧失。大量研究已表明,转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)在这一病理过程中发挥着关键性的作用。TGF-β1通过细胞内信号转导通路发挥作用,而Smad是其目的基因转录的主要信号转导蛋白。这一信号转导通路受到严格而精确的调控,从而保证在正常的生理条件下信号输出的稳定性。泛素-蛋白酶体通路(Ubiquitin Proteasome Pathway,UPP)作为真核细胞中选择性调节内源性蛋白质降解与功能的重要系统,它广泛参与了细胞周期调控、凋亡、信号转导、抗原提呈等多种生理过程,因而对维持细胞的稳态有着十分重要的意义。国内外研究发现,泛素-蛋白酶体通路功能的改变或异常可直接导致或诱发人类许多重要疾病。近年来研究表明,泛素-蛋白酶体抑制剂能够减轻或抑制实验性肝、肾、心脏、骨髓、皮肤和肺纤维化,但其具体的分子机制尚不十分清楚。MG132是一种醛基肽类泛素-蛋白酶体抑制剂,能够抑制细胞中不同类型蛋白酶的活性,从而阻断靶蛋白的泛素化降解,目前在实验研究中得到广泛应用。目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化的影响及可能的分子机制方法(1)体外培养人肺成纤维细胞MRC-5。(2)MTS法检测TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5增殖活性的影响。(3)以人肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,随机分为3组:对照组(未加入TGF-β1或MG132);TGF-β1组(10 ng/mL);MG132组[TGF-β1(10 ng/mL)+MG132(0.5μmol/L)]。(4)Western blot方法检测各组细胞中α-SMA和I型胶原α1(collagen type I alpha 1,COL1A1)的表达情况。(5)RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞中TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2、Smad3、Smad7及核转录共抑制因子Sno N的mRNA及蛋白表达情况。结果(1)TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5的增殖具有明显促进作用,且10ng/ml为最佳作用浓度;同时TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5表现出明显的抗增殖抑制作用。(2)与对照组比较,TGF-β1组中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平明显增加(P<0.05);与单纯TGF-β1刺激组比较,MG132组上述2种蛋白表达水平均有所下降(P<0.05)。(3)与对照组比较,TGF-β1组和MG132组Smad7和Sno N mRNA的表达水平均有所增加(P<0.05),而MG132组与单纯TGF-β1刺激组比较表达水平相仿(P>0.05)。与mRNA表达水平相反,TGF-β1组Smad7和Sno N蛋白表达水平与对照组比较均有所减少(P<0.05);与单纯TGF-β1刺激组比较,MG132组Smad7和Sno N蛋白表达水平均有所增加(P<0.05)。(4)TGF-β1组和MG132组TβRI mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均有所增加(P<0.05),而MG132组与单纯TGF-β1刺激组比较其表达水平相仿(P>0.05)。(5)叁组细胞Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平相仿(P>0.05)。结论(1)TGF-β1对人肺成纤维细胞具有促进增殖及抗增殖抑制作用;(2)泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1活化人肺成纤维细胞具有抑制作用;(3)泛素-蛋白酶体抑制剂MG132可能通过阻止Smad7和Sno N蛋白的泛素化降解,而增强对人肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路的抑制作用,进而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。(本文来源于《暨南大学》期刊2015-06-30）
李明,刘跃亮[2]（2015）在《泛素蛋白酶体抑制剂的分子机制》一文中研究指出生物体细胞在精细的调节之下进行蛋白质合成,这有助于维持机体细胞的正常增殖、分化和代谢运转,以及选择性地降解多余无用的蛋白质。泛素化蛋白质降解系统,是机体内蛋白质降解的另一主要方式。该系统步骤多、过程复杂,主要包括底物蛋白质的多泛素化修饰和26S蛋白水解酶复合物对底物蛋白质的降解。由机体细胞自然识别程序识别出需要降解的蛋白质,泛素蛋白分子通过共轭双键与底物蛋白质连接形成标签蛋白(即泛素降解底物蛋白质),再被26S蛋白水解酶复合物(本文来源于《检验医学与临床》期刊2015年05期）
黄为,李声娜,黄苏,徐标[3]（2014）在《泛素蛋白酶体抑制剂抑制钙调神经磷酸酶依赖的心肌细胞肥大》一文中研究指出目的研究泛素蛋白酶体抑制剂MG262对钙调神经磷酸酶信号通路的影响,探讨其抑制心肌细胞肥大的机制。方法在去甲肾上腺素诱导培养的乳鼠肥大心肌细胞中加入MG262,通过Phalloidin染色观察细胞的形态,RNA Dot Blot检测胚胎蛋白基因表达,Western blot检测细胞中钙调神经磷酸酶蛋白含量,免疫荧光标记观察活化T细胞核因子c4(NFATc4)蛋白在细胞内分布。结果去甲肾上腺素使细胞面积增大近1.1倍,胚胎基因心房利钠因子(ANF)、脑钠肽(BNP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达上调,细胞核内NFATc4蛋白表达水平增加。MG262明显抑制去甲肾上腺素诱导的细胞肥大(P<0.05)和ANP、BNP、β-MHC的mRNA表达上调(P<0.05),细胞面积下降了33%;同时MG262使去甲肾上腺素诱导的细胞钙调神经磷酸酶蛋白表达水平下降,抑制NFATc4核内转位。结论 MG262可能通过抑制钙调神经磷酸酶信号通路,减轻心肌细胞肥大。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2014年08期）
刘宪斌[4]（2010）在《泛素—蛋白酶体抑制剂诱导头颈部鳞癌细胞凋亡的实验研究》一文中研究指出目的探讨内质网应激在泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132诱导人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞凋亡中的作用及其相关机制。方法使用含10%胎牛血清的RPMI-1 640培养基常规培养Tca-8113细胞,将指数生长期细胞随机分为5组：培养液中分别加入1640培养基(阴性对照组)、毒胡萝卜素5μmol/L(阳性对照组)、和10、20、30μmol/L的MG-1 32组。继续培养18h后,进行如下实验：MTT实验在490nm波长下测吸光度,检测MG-132对Tca-8113细胞活性的影响；采用荧光染料Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞核染色质的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞中DNA ladder的形成;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率；RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78)、caspase-12 mRNA的表达；Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78、caspase-12蛋白的表达;ELISA检测人泛素蛋白连接酶E3浓度。结果MTT实验：阴性对照组、毒胡萝卜素组和低、中、高浓度MG-132组的吸光度分别为0.515±0.265、0.170±0.690、0.292±0.420、0.222±0.106、0.148±0.205,与阴性对照组比较,均有统计学意义,其中低浓度MG-132组P<0.05,其余各组P<0.01;Hoechst 33258染色结果显示：毒胡萝卜素组、和10、20、30μmol/L的MG-132组细胞出现典型的细胞核染色质凋亡形态,且Tca-8113细胞凋亡形态学的改变与MG-132存在浓度依赖性；DNA片断化检测：MG-132各组和毒胡萝卜素组梯形条带灰度较对照组明显增加,并有浓度依赖关系,尤其以高浓度组明显;流式细胞仪检测：阴性对照组、毒胡萝卜素组和MG-132各实验组凋亡率分别为0.43±0.25%、8.49±0.25%、1 3.50±0.41%、1 9.55±0.32%和34.74±0.50%;RT-PCR检测结果：MG-1 32可引起GRP78、caspase-12的mRNA表达增强；Western-blot检测结果：MG-132可引起GRP78、caspase-12的蛋白表达增强：ELISA检测结果：阴性对照组、毒胡萝卜素组和MG-1 32实验组人泛素连接酶E3的表达量分别为40.88±4.52、38.96±0.33、28.75±2.28、1 8.16±0.65和8.85±0.72。结论1、泛素-蛋白酶体抑制剂MG-1 32可诱导人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞的凋亡;2、MG-132可引起Tca-8113细胞的内质网应激,表现在GPR78的mRNA及蛋白的表达增加;3、MG-132可引起Tca-8 113细胞内质网应激反应性凋亡,表现在剪切、活化procaspase-12,提升caspase-12 mRNA及蛋白的表达;4、MG-132可抑制人泛素连接酶E3的表达,这一点不同于内质网应激的典型诱导剂毒胡萝卜素。意义本研究探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132诱导人舌鳞癌细胞Tca-8113凋亡的作用及其与内质网应激途径诱导细胞凋亡的关系,揭示泛素-蛋白酶体通路在肿瘤细胞凋亡中的作用及其可能的机制,为泛素-蛋白酶体抑制剂应用于头颈部鳞癌的治疗提供理论依据的同时,也为肿瘤治疗拓展了新的思路。(本文来源于《泰山医学院》期刊2010-06-30）
徐玲,马红艳,杨军,徐勇[5]（2009）在《高糖和泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠肾系膜细胞IκB-α蛋白表达的影响》一文中研究指出目的探讨泛素蛋白酶体途径对高糖刺激的肾系膜细胞IκB-α蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠HBZY-1肾系膜细胞,高糖作为刺激因子,MG132作为干预因素。分别设正常对照组、高糖组(10,20,30mmol/L葡萄糖)、甘露醇组以及MG/32加高糖(30mmol/L)组,分别作用12、24、48小时,用Western blot法测各组IκB-α蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组比较,高糖作用后IκB-BRA蛋白的表达呈时间、浓BZ度依赖性下降。(2)与高糖组比较,高糖加入MG132后,IκB-α蛋白的表达下降被明显逆转。结论高糖可通过泛素蛋白酶体途径促进肾系膜细胞IJLB-α蛋白泛素化降解。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2009年06期）
顾光华,孔祥[6]（2009）在《泛素蛋白酶体通路以及蛋白酶抑制剂对NF-κB信号通路作用的研究进展》一文中研究指出1蛋白酶体及泛素-蛋白酶体通路(UPP)蛋白酶体是指有蛋白降解作用的酶复合体,存在于所有真核细胞中,占细胞蛋白总量的近1%。大多数的蛋白酶体自由分布于胞核和细胞质中,而部分是与不同细胞成分固定结合,在个别被成为PML小体的亚核中浓缩存在。在细胞质中蛋白酶(本文来源于《实用临床医药杂志》期刊2009年09期）
克日阿且[7]（2009）在《泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠早期糖尿病肾病的影响研究》一文中研究指出目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠早期糖尿病肾病的治疗作用及其作用可能机制。方法:①动物模型的建立:将50只Wistar大鼠随机分为模型组(40只)和阴性对照组(N组,10只)。模型组给予一次性腹腔注射STZ60mg/kg,阴性对照组给予等剂量的枸橼酸缓冲液腹腔注射。一周后模型组中有35只大鼠空腹血糖大于16.8mmol/L,确定为糖尿病,并随机选择30只进行分组。②模型组分组:将30只糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组(D组)、MG132高浓度处理组(H组)和MG132低浓度处理组(L组),每组均为10只。分别于腹腔注射MG132 6周和8周后处死大鼠并纳入以下实验(每个时间点各组大鼠为5只)。③测定空腹血糖和尿白蛋白。④光镜和电镜观察肾脏超微结构变化。⑤蛋白免疫印迹(Western-Blot)法检测TGF-?、smad7蛋白表达;RT-PCR法检测纤维连接蛋白(FN)mRNA表达。⑥统计学处理:应用SPSS15.0统计软件分析数据,数据以ˉx±s表示,采用完全随机方差分析法,P<0.05表示统计学有意义。结果:①一般情况:与正常组(N组)比较,各模型组大鼠明显消瘦,摄食、饮水、尿量增加,毛色欠光泽,精神怠倦。MG132高浓度组(H组)、低浓度组(L组)大鼠一般情况较糖尿病对照组(D组)有所减轻。②体重和空腹血糖结果:与正常组(N组)比较,各模型组大鼠6周和8周体重明显减轻,空腹血糖显着升高(P<0.01);经MG132处理后MG132高浓度组(H组)、低浓度组(L组)大鼠体重较糖尿病对照组增加(P<0.05);糖尿病对照组(D组)大鼠8周体重较6周减少(P<0.05),MG132高、低浓度组8周体重较6周增加(P<0.05)。③肾脏重量、肾重指数变化:与正常组相比,各模型组大鼠肾脏重量及肾重指数明显增加(P<0.05);MG132高浓度组(H组)、低浓度组(L组)大鼠肾脏重量及肾重指数较糖尿病对照组(D组)减少(P<0.05)。④尿量、尿微量白蛋白、尿蛋白浓度/尿肌酐浓度比值:与正常组(N组)相比,各模型组大鼠6周和8周24小时尿量、尿微量白蛋白及尿蛋白浓度/尿肌酐浓度比值均增加(P<0.01);经MG132处理后,H、L组大鼠24小时尿微量白蛋白及尿蛋白浓度/尿肌酐浓度比值较糖尿病对照组减少(P<0.05)。⑤血尿素氮与肌酐结果:与正常组(N组)比较,各模型组大鼠6周、8周血肌酐减少(P<0.01),血尿素氮增加(P<0.01);与糖尿病对照组(D组)相比,MG132高浓度组(H组)、低浓度组(L组)大鼠血肌酐增加(P<0.05),血尿素氮减少(P<0.05)。⑥.光镜和电镜检查结果:光镜下各模型组大鼠肾小球体积明显增大,其中以糖尿病对照组最为显着;电镜下各模型组大鼠均可见部分基底膜不规则增厚,足突间隙增宽或融合,内皮细胞水肿等。以上改变在H组、L组较D组轻,H组较L组轻。⑦.大鼠肾脏组织smad7和TGF-?蛋白表达含量变化:与正常组(N组)比较,糖尿病对照组(D组)大鼠肾脏smad7蛋白表达降低(P<0.01),TGF-?蛋白表达增加(P<0.01);经MG132处理后,与糖尿病对照组(D组)比较,MG132高、低浓度组TGF-?表达减少(P<0.01),smad7表达增加(P<0.01);MG132高浓度组TGF-?表达量较MG132低浓度组减少(P<0.05),smad7表达较MG132低浓度组增加(P<0.05);随时间延长,8周与6周间差异愈加显着(P<0.05)。⑧.肾组织FNmRNA表达变化:与正常组(N组)相比,糖尿病对照组(D组)大鼠肾脏FN mRNA表达明显增加(P<0.05);MG132高浓度组(H组)和MG132低浓度组(L组)大鼠肾脏FNmRNA表达较糖尿病对照组(D组)减少(P<0.05)。结论:1. MG132可以减少DN大鼠尿蛋白及肾脏TGF-β蛋白、FNmRNA的表达,增加smad7蛋白的表达,减轻肾脏基底膜增厚、内皮细胞水肿及足突损伤等病理改变,对糖尿病肾病具有部分治疗作用。2.泛素蛋白酶体途径对smad7蛋白的降解增加可能参与了糖尿病肾病的发病过程,有效抑制泛素蛋白酶体途径的活性可能将成为防治糖尿病肾病的新的方法。(本文来源于《泸州医学院》期刊2009-05-01）
林美丽,罗沛华,杨溦,涂崇兴,杨波[8]（2009）在《泛素蛋白酶体抑制剂(MG132)联合维甲酸诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的:体外观察泛素蛋白酶体抑制剂(MG132)联合维甲酸(全反式维甲酸ATRA,9-顺式维甲酸9C-RA)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y及CHP126细胞生长及分化的影响及其可能的分子机制。方法:台盼蓝拒染活细胞计数法绘制细胞生长曲线;Leica倒置显微镜记录细胞形态变化并用相关软件分析细胞突触生长情况,并用统计学方法计算细胞分化比率;细胞免疫荧光(IF)检测神经母细胞瘤分化标记蛋白(TAU,β-Ⅲtubulin)的表达情况;Realtime PCR检测药物作用前后神经母细胞瘤分化标记蛋白及维甲酸受体(RXRα,RARβ,RXRγ)的基因表达情况;Western blotting检测神经母细胞瘤分化相关蛋白,维甲酸受体蛋白及周期相关蛋白(CDK6,cyclinD1和p-pRb)的表达情况。结果:蛋白酶体抑制剂(MG132)与维甲酸联用组较维甲酸单用组细胞增殖抑制更明显;细胞突触更长更多MG132与ATRA和9cis-RA合用组中,细胞突触明显增多增长,SH-SY5Y细胞ATRA组与对照组相比增加了11.4倍,9cis-RA组增加了11倍,ATRA与MG132合用组增加了17倍,9cis-RA与MG132合用组增加了20.4倍;CHP126细胞ATRA组与对照组相比增加了12.7倍,9cis-RA组增加了14.0倍,ATRA与MG132合用组增加了16.6倍,9cis-RA与MG132合用组增加了18.5倍。两组细胞维甲酸单用及合用组已分化细胞比率高于空白组及MG132单用组,且维甲酸与MG132合用组明显高于维甲酸单用组。细胞免疫荧光检测神经母细胞瘤分化标记蛋白(TAU,β-Ⅲtubulin),其中MG132与维甲酸联用组表达高于维甲酸单用组。Real time PCR测得MG132与维甲酸联用组细胞神经母细胞瘤分化标记蛋白TAU,MAP2 mRNA表达增高,与维甲酸单用组比较,合用组维甲酸受体RARβmRNA表达增高23.1倍。根据多篇文献报道,在无维甲酸诱导的情况下,RARβ是作为肿瘤抑制因子对神经母细胞瘤病人预后起着重要的作用。因此我们又通过Western blotting检测MG132与维甲酸联用组较维甲酸单用组,RARβ表达增多。进一步探讨其作用机制,发现RXRα表达减少;细胞周期相关蛋白CDK6 cyclin D1及p-PRb表达下调。结论:蛋白酶体抑制剂(MG132)与维甲酸联用更有利于抑制神经母细胞瘤增殖和诱导其分化,主要通过细胞周期阻滞在G0/G1期,下调RXRα表达,从而诱导神经母细胞瘤细胞维甲酸受体RARβ高度表达。(本文来源于《2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集》期刊2009-04-09）
董鑫[9]（2008）在《蛋白酶体抑制剂PS-341调控泛素—蛋白酶体途径在重症急性胰腺炎中的治疗作用及机制研究》一文中研究指出研究背景和目的:急性胰腺炎(AP)是一种严重威胁人类健康的常见疾病,临床病理变化复杂,对治疗的反应也各不相同,轻型水肿性胰腺炎是一种自限性疾病,对治疗反应好,多数可以治愈,而重症急性胰腺炎(SAP)起病急、进展快,早期即可发生全身炎症反应综合症(SIRS)、多器官功能不全(MODS),虽然现在对SAP的治疗较以前有了长足的进展,但死亡率仍高达10%-30%。重症急性胰腺炎的发病机制尚未完全明了,一直缺乏特异性的药物作用靶点,其临床治疗仍是一个国际性难题。现今观点认为重症急性胰腺炎的发病首先由胰蛋白酶在腺泡中异常活化引起胰腺腺泡细胞损伤,NF-κB活化、Ca~(2+)浓度升高在这一过程中起重要作用;活化的NF-κB促使胰腺组织及炎性细胞释放大量的炎性介质如TNF-α,IL-6和ICAM-1等,炎性介质间相互作用导致炎症信号的进一步放大;上述促炎症介质和同时产生的抗炎症介质如IL-2、IL-10、IL-1Ra等构成一个复杂的网络系统,两者的平衡失调引最终导致胰腺损伤;同时,大量细胞因子释放入血、ROS、NO及COX-2的产生等将引起SIRS.过度SIRS造成远离组织器官的损伤,继发MODS、脓毒血症。据此,在疾病的早期应用加贝脂、抑肽酶等蛋白酶抑制剂或细胞因子拮抗剂如TNF-α单克隆抗体、PAF拮抗剂等来治疗重症急性胰腺炎,从理论上讲能够减轻胰腺损伤、抑制炎症反应,但随后大规模的临床RCT研究证实这些治疗方法均无效,其最主要的原因是细胞因子间都是相互作用、相互影响的,共同组成炎症信号反应网络系统,因此抑制单一炎症介质活性并不能阻断炎症信号反应系统介导的整个炎症反应的演进过程。NF-κB是一种核转录因子,现被认为在重症急性胰腺炎的发病中起关键性调节作用。在正常细胞内,NF-κB和它的抑制性蛋白I-κB相结合,以非活性的形式存在于胞浆中。当细胞受到细菌、病毒、TNF-α、LPS等外源性刺激后,I-κB即发生磷酸化,进而泛素化,泛素化后的I-κB即可被26S proteasome识别并降解;至此,活化的NF-κB便移位到细胞核中,结合到靶基因的转录起始区域,激活细胞因子、粘附分子和COX-2等的表达。26S proteasome是细胞内最主要的非溶酶体溶蛋白酶复合物,其通过细胞周期时限特异性的生物学机制精确的调控细胞内70-90%的蛋白降解,NF-~:B的抑制因子I-vd3及许多与细胞周期循环和凋亡相关的重要因子、转录因子等都经此泛素-proteasome途径降解。Bortezomib,又称PS-341,是一种强效、高度选择性的proteasome抑制剂,它通过和26S proteasome的20S亚基快速、可逆的结合抑制酶复合物的活性,进而抑制了I-κB的降解,使NF-κB活性受到抑制,降低了TNF-a、IL-1、IL-8、COX-2等的表达,并可通过抑制P21、P27、P53、Bax降解和激活JNK等途径诱导细胞的凋亡。2003年5月13日PS-341已被美国FDA批准进入临床用于多发行骨髓瘤的治疗,现临床Ⅲ期验证已经取得令人满意的效果,这是第一个也是目前唯一一个进入临床的proteasome抑制剂,其相关研究获得了2004年诺贝尔化学奖。鉴于调控着体内许多细胞因子的产生和活化、并在重症胰腺炎的发病中起着关键性作用NF-κB为Proteasome的重要作用靶点之一,而PS-341为目前公认的特异性最强的proteasome抑制剂,因此,本课题拟利用PS-341能够特异性抑制NF-κB活性、诱导细胞凋亡的作用机制来验证和阐释PS-341对SAP的治疗保护作用,并通过micro PET这一先进的影像学检查方法直接观察PS-341在小鼠体内对胰腺微循环和炎细胞活性的影响,以期PS-341能够成为一种新的治疗重症急性胰腺炎的有效手段,从而推动SAP治疗研究的进展。本实验主要包括两部分研究内容:第一部分:PS-341对小鼠重症急性胰腺炎的治疗作用;第二部分:~(18)F-FDG-PET在重症急性胰腺炎早期诊断和疗效评价中的应用价值。第一部分PS-341对小鼠重症急性胰腺炎的治疗作用实验材料和方法:健康雌性ICR小鼠144只,体重20g+1g。随机分为PS-341治疗组,模型对照组和空白对照组,其中PS-341治疗组64只,模型对照组40只,空白对照组40只。重症急性胰腺炎模型的建立通过连续7次腹腔注射50ug/kg雨蛙素,每次间隔一小时,并在首次注射雨蛙素5小时后腹腔注射10mg/kg脂多糖。为了确定PS-341的最佳有效浓度,不同剂量的PS-341(0.1,0.2,0.5,1.0mg/kg)在注射脂多糖半小时前腹腔内注入,模型对照组和空白对照组分别注射同等剂量的安慰剂,首次雨蛙素注射后8小时取血和胰腺组织,测血清淀粉酶、CRP和LDH。为了验证PS-341治疗的最佳有效作用时间,分别于用药后8小时、12小时和24小时将小鼠用50mg/kg的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,取血、胰腺和肺组织,而后通过组织病理检测和western blot、ILISA、RT-PCR等经典的实验方法来验证PS-341对小鼠重症急性胰腺炎的治疗作用。。结果:本研究发现,PS-341的最佳有效浓度为0.5mg/kg,造模后8小时治疗效果最好。雨蛙素联合脂多糖小鼠腹腔内注射后,小鼠胰腺呈现典型的出血、坏死病理表现,血淀粉酶值明显升高,造模后小鼠肺脏病理结构改变表现为肺不张,肺泡渗出增多,炎性细胞浸润明显。生化及分子生物学检测示血清淀粉酶、C-反应蛋白、乳酸脱氢酶、白细胞介素-1β、白细胞介素—6、胰腺组织中细胞黏附分子ICAM-1的表达都较空白对照组明显升高。PS-341治疗后,胰腺组织中I-κB降解减少,NF-κB活性显着下降,胰腺出血、坏死和炎细胞浸润明显减轻,肺泡渗出减少。血清淀粉酶、C-反应蛋白、乳酸脱氢酶、白细胞介素-1β、白细胞介素—6、胰腺组织中细胞黏附分子ICAM-1的表达都较对照组显着下降,而组织中细胞凋亡数明显增多。结论:雨蛙素联合脂多糖腹腔注射诱导小鼠重症急性胰腺炎模型是一种经典的实验方法。PS-341治疗后能够明显减轻重症急性胰腺炎的严重程度,血清淀粉酶、C-反应蛋白、乳酸脱氢酶、白细胞介素-1β、白细胞介素—6、胰腺组织中细胞黏附分子ICAM-1的表达显着下降,组织病理损伤也明显减轻,因此,PS-341有可能成为新的治疗重症急性胰腺炎的有效药物,并在临床得到推广应用。第二部分~(18)F-FDG-PET在重症急性胰腺炎早期诊断和疗效评价中的应用价值实验材料和方法:健康雌性ICR小鼠33只,体重20g+1g,随机分为PS-341治疗组,模型对照组和空白对照组,每组11只。重症急性胰腺炎模型的建立同上,空白对照组用等量的生理盐水代替雨蛙素和脂多糖腹腔注射。PS-341(0.5mg/kg)在脂多糖注射前半小时腹腔内注入,模型对照组和空白对照组分别注射同等剂量的安慰剂。首次雨蛙素注射后8小时,将小鼠用50mg/kg的戊巴比妥钠腹腔麻醉,每组3只行PET胰腺扫描,另外8只取胰腺组织,匀浆后测MPO。结果:正常对照组PET扫描时胰腺不显影,当诱导建立重症急性胰腺炎模型后,胰腺~(18)F-FDG的吸收率明显增高,PET图像上胰腺呈一鲜亮条带;PS-341治疗后胰腺~(18)F-FDG的吸收率显着降低。MPO测定结果同PET一致,造模后MPO活性显着升高,PS-341治疗后MPO活性明显下降,进一步验证了~(18)F-FDG-PET在重症急性胰腺炎诊断和疗效评价中的应用价值。结论:~(18)F-FDG-PET是一种直观、准确的分子影像学诊断方法,能够动态监测重症急性胰腺炎的发展和转归,评价干预治疗效果,为临床诊断和调整治疗方案提供依据。(本文来源于《浙江大学》期刊2008-06-01）
赵霞[10]（2008）在《Smg1 knockdown和泛素—蛋白酶体抑制剂导致Upf1和Upf2表达的增加》一文中研究指出第一部分Smg1 konckdown导致Upf1和Upf2表达的升高背景及目的mRNA的降解是基因表达过程中一个很重要的调控方式。目前已知真核细胞mRNA的降解有叁种途径,其中无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay, NMD)是近年发现的一种在真核生物中广泛存在的高度保守的RNA监控(RNA surveillance)机制。NMD能够选择性地降解含有提前终止翻译密码子(premature termination condon, PTC,又称无义密码子)的mRNA,从而阻止异常的截短蛋白(truncated protein)的产生。这种截短蛋白不仅不具有正常的生理功能,而且能与正常蛋白发生竞争,从而影响细胞的正常生理功能。NMD途径需要有剪接、翻译、磷酸化过程以及特异蛋白质组分的参与。作为剪接的结果,在mRNA的外显子-外显子连接(exon-exon junction,EEJ)的上游20-24个核苷酸处装配有外显子连接复合物(exon junction complex,EJC),对于NMD是必需的。Upf(up-frameshift mutant)是目前研究较多的NMD反式作用因子,包括Upf1、Upf2和Upf3。当前体mRNA发生剪接后,EJC与核浆穿梭蛋白upf3和TAP结合,介导mRNA出核。出核后,Upf2通过与Upf3结合而补充到mRNA上,mRNA与核糖体结合并开始翻译。正常情况下,核糖体会沿着mRNA滑动将所有EJC清除,直至遇到正常终止密码子后终止翻译。如果核糖体在距EJC上游>50-55 nt处遇到PTC,翻译将提前终止,由Smg1、Upf1、eRF等组成的SURF(SMG1-Upf1-eRF)复合物与Upf2结合,最终导致mRNA的脱帽和降解。Smg1是NMD组分中一个很重要的因子,它作为一个PI-3激酶,与另一NMD组分Upf1相结合并对其进行磷酸化,同时形成SURF复合物。后者与Upf2结合并最终导致无义mRNA的降解。Smg1和Upf1不仅作为NMD的重要组分,而且还参与DNA代谢过程。有研究报道,抑制Upf1基因的表达可以导致S早期捕获和DNA损伤反应。Smg1也被报道参与细胞周期的运行和DNA损伤的关键步骤。这些报道说明NMD组分通过多途径参与基因信息稳定性的维持。然而,目前对NMD各组分的定量调节机制还所知甚少。方法为了探讨Smg1对Upf1及Upf2含量的影响,本研究用RNAi方法使Hela细胞Smg1 knockdown,然后利用western blot观察其对Upf1和Upf2的蛋白表达的影响,用免疫荧光观察Upf1和Upf2在细胞中的定位及其荧光强度的变化,用realtime-PCR方法观察其对Upf1和Upf2的mRNA水平的影响;并利用不同的细胞系和不同序列的RNAi片段,对实验结果加以证实。结果(1) Western blotting结果显示,和Luciferase SiRNA转染的细胞相比,用SMG1 5032 SiRNA转染的Hela细胞中,Smg1的蛋白含量明显降低,说明Smg1被成功地knockdown,基因受到抑制;(2)在Smg1 5032、2999、5202几种SiRNA转染的细胞中,Upf1和Upf2的蛋白表达明显增高,说明Smg1 knockdown能够导致Upf1和Upf2蛋白的表达增加。(3) Smg1 SiRNA同样能够导致A549和HE-4细胞中Upf1和Upf2的蛋白表达升高,说明Smg1 knockdown对Upf1和Upf2蛋白的上调作用在培养的人类细胞系中是一个普遍现象。(4)经过Smg1 5032 SiRNA和Smg1 2999 SiRNA转染的细胞,分别提取细胞核和细胞浆蛋白,western blotting显示Upf1和Upf2蛋白表达的增高同时出现于胞浆蛋白和胞核蛋白中。结果说明,Smg1 knockdown能够导致胞浆和胞核中的Upf1和Upf2蛋白同时增加。(5)免疫荧光染色结果显示,Smg1主要位于胞浆内,在胞核内也有少量表达;Upf1蛋白为胞浆蛋白,主要位于细胞浆内;Upf2则主要位于围绕核膜的核周区,荧光染色显示一条绿色的细线。与Luciferase SiRNA转染的细胞相比,Smg1 knockdown的细胞中Smg1的荧光强度明显降低,而Upf1和Upf2的荧光强度均明显升高。此结果与前面的结果一致,从形态学上进一步证实了Smg1 knockdown能够导致Upf1和Upf2蛋白表达的升高。(6)经过Smg1 knockdown的细胞,其细胞中Smg1的mRNA水平明显降低,证实了Smg1 SiRNA的基因抑制作用;同时,细胞中Upf1和Upf2的mRNA水平没有显着升高或降低,说明Smg1 knockdown不能影响细胞中Upf1和Upf2的mRNA水平,其所导致的Upf1和Upf2表达增高可能是翻译后水平的升高。结论本研究首次阐明了Upf1和Upf2的定量调节机制,提示Smg1 knockdown导致人细胞系中Upf1和Upf2蛋白的表达升高,亦即Smg1参与Upf1和Upf2蛋白的下调。第二部分泛素-蛋白酶体抑制剂导致Upf1和Upf2表达的升高背景及目的泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)是真核细胞内主要的蛋白水解酶体系,由泛素(ubiquitin,Ub)、泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素耦联酶(ubiquitin-conjugating enzymes,E2s)、泛素一蛋白连接酶(ubiquitin-protein ligating enzymes,E3s)、26S蛋白酶体(26S proteasome)以及泛素再循环酶(ubiquitin recycling enzymes)等组成。泛素分子主要通过泛素活化酶、泛素结合酶和泛素-蛋白连接酶与靶蛋白结合形成一条多泛素链,将底物蛋白泛素化,使靶蛋白被26S蛋白酶体所识别和降解。泛素一蛋白酶体系统是细胞内叁磷酸腺苷(adeno-sine triphosphate,ATP)依赖的非溶酶体蛋白降解机制,可高效并高选择性地降解细胞内蛋白质,参与细胞的多种生理活动过程,比如细胞凋亡、MHC I类抗原的递呈、细胞周期以及细胞内信号传导等,对维持细胞正常的生理功能具有十分重要的意义。UPS对蛋白质的降解包括两个连续的步骤:(1)在多种蛋白酶的作用下,多个Ub分子与底物蛋白结合,从而标记底物蛋白;(2)标记了的底物蛋白,被26S蛋白酶体识别而降解。在第一步Ub标记底物蛋白的过程中,目前认为至少需要3个接连反应来完成:首先,Ub与E1结合,形成高能硫脂键,使Ub活化;而后通过转脂作用,Ub从El转移到E2s上;活化的Ub再从E2s转移到E3s,并与底物结合,形成底物一E3s复合物,使底物发生Ub化,即多个Ub分之通过异肽键与底物蛋白链接,形成多聚泛素链。第二步:首先由26S蛋白酶体两端的19s调节亚基识别、结合并展平Ub化的底物蛋白,然后.由26S蛋白酶体的催化核心20S亚基,将蛋白质水解为多肽;最后,多聚Ub链在泛素再循环酶的作用下,释放出Ub,以重新利用,从而形成Ub的再循环途径。为了探讨泛素-蛋白酶体系统这一被机体广泛应用的蛋白降解机制是否也适用于NMD系统,本研究采用泛素-蛋白酶体抑制剂MG132和lactacystin作用于Hela细胞,观察其对Upf1和Upf2蛋白表达的影响。方法利用泛素-蛋白酶体抑制剂MG132和lactacystin作用于Hela细胞,用western blot观察其对Upf1和Upf2蛋白表达的影响,用免疫荧光观察Upf1和Upf2在细胞中荧光强度的变化,用realtime-PCR方法观察其对Upf1和Upf2的mRNA水平的影响,同时用免疫共沉淀方法检测Upf1和泛素分子之间的相互作用。为了探讨Smg1和泛素-蛋白酶体系统对Upf1和Upf2作用之间的关系,本研究同时利用SMG1 knockdown和泛素-蛋白酶体抑制剂作用于Hela细胞,观察Upf1和Upf2的表达是否有所改变。结果(1)Western blotting结果显示,利用泛素-蛋白酶体抑制剂MG132和Lactacystin,Hela细胞中的Upf1和Upf2蛋白表达明显增加;免疫荧光染色结果中,二者的荧光强度也相应增加;但是,通过realtime-PCR的检测,我们不能观察到二者mRNA水平的变化。(2)用泛素-蛋白酶体抑制剂MG132作用于Hela细胞,收集细胞后分别用anti Upf1抗体和anti ubiquitin抗体进行免疫沉淀检测,实验结果显示,与DMSO组细胞相比,MG132处理后的细胞与Upf1共沉淀时,Upf1的蛋白表达明显升高,但是不能观察到Upf1的条带迁移,而且也不能检测到ubiquitin的存在;在与ubiquitin共沉淀时,我们也不能观察到与Upf1分子量大小相当的条带出现。结果表明,泛素-蛋白酶体系统抑制剂不能直接导致Upf1分子的多泛素化。(3)将泛素-蛋白酶体抑制剂MG132作用于经过SMG1 knockdown的Hela细胞中,结果发现,随着抑制剂浓度的增加,Upf1和Upf2的蛋白表达也随之增高,说明SMG1 knockdown和泛素-蛋白酶体抑制剂对Upf1和Upf2的调节具有累加作用,虽然并不排除有部分的重迭。结论泛素-蛋白酶体系统抑制剂导致Upf1和Upf2蛋白表达的增加,亦即泛素-蛋白酶体系统对Upf1和Upf2蛋白有下调作用。但是,Upf1分子不能被直接泛素化,推测泛素-蛋白酶体系统可能是通过其靶分子来间接地导致Upf1的降解。Smg1 knockdown和泛素-蛋白酶体抑制剂的同时作用使Upf1和Upf2的蛋白升高具有累加效应,说明Smg1和泛素-蛋白酶体系统是通过不同的机制和通路对Upf1和Upf2进行调节的。(本文来源于《华中科技大学》期刊2008-05-01）
泛素蛋白酶体抑制剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
生物体细胞在精细的调节之下进行蛋白质合成,这有助于维持机体细胞的正常增殖、分化和代谢运转,以及选择性地降解多余无用的蛋白质。泛素化蛋白质降解系统,是机体内蛋白质降解的另一主要方式。该系统步骤多、过程复杂,主要包括底物蛋白质的多泛素化修饰和26S蛋白水解酶复合物对底物蛋白质的降解。由机体细胞自然识别程序识别出需要降解的蛋白质,泛素蛋白分子通过共轭双键与底物蛋白质连接形成标签蛋白(即泛素降解底物蛋白质),再被26S蛋白水解酶复合物
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
泛素蛋白酶体抑制剂论文参考文献
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标签：泛素-蛋白酶体通路; 泛素-蛋白酶体抑制剂; 肺成纤维细胞; 转化生长因子β1;