小鼠肺纤维化模型中CD4+CD25+调节性T细胞及相关细胞因子的研究

论文摘要

特发性肺纤维化是一种慢性而致命的肺部失调疾病。持续的肺纤维化会导致肺功能的丧失最终导致死亡。导致肺纤维化的原因很多,其中的分子机制依然不明朗,且存在很多争论。有很多证据表明,纤维细胞的增生、细胞外基质的沉积和疤痕的积累是肺纤维化的特征标志,而这些则会导致不恰当的、不受调控的组织重建。传统的免疫学治疗法效果很差,这提示我们肺纤维化可能有其他的发病机制。近年来对CD4+CD25+T调节细胞（CD4+CD25+T regulatory cell, Treg）的研究取得到了较大进展。本实验通过建立博来霉素（bleomycin, BLM）诱导的肺纤维化模型,检测Treg细胞亚群在T淋巴细胞中的动态变化,探索了Treg细胞和其关的细胞因子是否在肺纤维化中起到了重要作用。主要结果如下：1.BLM组中的小鼠外周血中的T淋巴细胞在2天、4天、8天和16天时显著大于空白组。BLM组中的小鼠肺灌洗液中的T淋巴细胞在8天时显著高于空白组,其它时间点无明显差异。2.BLM组的小鼠外周血中的CD25+Foxp3+T细胞在CD4+T细胞中的比例在第4天时显著低于其它两组,其它时间点无显著差别。BLM组的小鼠肺灌洗液中的始终处于显著低水平。3.BLM组小鼠外周血中Treg细胞的浓度在2天和4天时显著降低,在8天和16天显著升高,32天时组间无明显差异。BLM组小鼠肺灌洗液中Treg细胞的浓度在4天、8天和16天时显著高于空白组。4.BLM组肺灌洗液中的IL-21在2天、16天和32天时显著降低。BLM组肺灌洗液中的TGF-β各组间各时间点无显著性差异。在BLM组肺灌洗液中,IL-1α在2天、8天、16天和32天时显著低于空白组；IL-1β在各组间各时间点无显著性差异；IL-2在2天、8天和16天时显著低于空白组；IL-4在16天时显著低于空白组；IL-6在2天、4天、8天和16天时显著高于空白组,而空白组和生理盐水各组间无明显差异；IFN-γ在2天、4天、8天和16天时显著低于空白组。结论：Treg细胞在CD4+T细胞中的比例减少在肺纤维化的发生发展过程中起着重要作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 肺纤维化（PF）研究的进展
• 1.1 肺纤维化现况
• 1.2 肺纤维化相关的的主要细胞和细胞因子
• 1.3 肺纤维化模型的建立
• 2 Treg细胞的研究进展
• 2.1 Treg细胞的分类与成熟过程
• 2.2 Treg细胞的特征标记
• 2.3 Treg细胞与人类疾病
• 3 流式细胞技术
• 3.1 流式细胞术特点与应用
• 3.2 流式细胞术的原理
• 第二章 材料与方法
• 1 材料与试剂
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 常用实验仪器
• 1.4 主要溶液的配制
• 2 实验方法
• 2.1 博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的建立
• 2.2 抗凝血的制备
• 2.3 肺灌洗液的制备
• 2.4 抗凝血和肺灌洗液中淋巴细胞计数
• 2.5 流式细胞法检测Treg细胞步骤
• 2.6 ELISA法测定小鼠转化生长因子-β、白细胞介素-21
• 2.7 悬浮芯片法测定肺灌洗液中的IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ
• 2.8 统计学分析
• 2.9 Masson染色法检测小鼠肺部标本
• 2.9.1 肺组织标本制备
• 2.9.2 Masson染色步骤
• 第三章 结果与分析
• 1 小鼠术后状态观察
• 2 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液淋巴细胞计数结果
• 2.1 不同时期小鼠外周血淋巴细胞计数结果
• 2.2 不同时期小鼠肺灌洗液淋巴细胞计数结果
• 3 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg细胞流式检测结果
• 3.1 不同时期小鼠外周血Treg细胞流式检测结果
• 3.2 不同时期小鼠肺灌洗液Treg细胞流式检测结果
• 4 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg细胞占淋巴细胞比例
• 4.1 不同时期小鼠外周血Treg细胞占淋巴细胞比例
• 4.2 不同时期小鼠肺灌洗液Treg细胞占淋巴细胞比例
• 5 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg浓度变化
• 6 肺灌洗液中细胞因子检测结果
• 6.1 ELISA检测肺灌洗液中的IL-21
• 6.2 ELISA法检测肺灌洗液中的TGF-β
• 6.3 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-1α
• 6.4 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-1β
• 6.5 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-2
• 6.6 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-4
• 6.7 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-6
• 6.8 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IFN-γ
• 7 小鼠肺组织病理切片Masson法染色结果
• 第四章 总结与讨论
• 全文总结、创新点与下一步研究计划
• 1 结论
• 2 创新点
• 3 下一步研究计划
• 参考文献
• 英文缩略词表（abbreviations）
• 致谢
• 作者简介
• 个人信息
• 教育背景
• 在读期间发表论文