论文摘要
【目的】 本实验通过体外培养和体内实验的方法,建立原代心肌细胞柯萨奇病毒感染性病毒性心肌炎（VMC）模型和BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型,用中药虎杖甙（PD）处理该疾病模型,观察对该疾病的干预作用并探讨其作用机理,为基础研究、临床治疗和药物筛选提供有效的指导。 【方法】 体外SD大鼠乳鼠原代心肌细胞分离培养,用100 TCID50柯萨奇B3病毒（CVB3）感染心肌细胞,建立病毒性心肌炎实验模型,然后分别用0.02 mmol/L、0.2 mmol/L、2 mmol/L三种不同浓度的虎杖甙处理感染CVB3病毒的心肌细胞,观察心肌细胞的形态和搏动,用细胞免疫荧光技术标记纤维状肌动蛋白（F-actin）和VEGF蛋白,四唑蓝比色法（MTTAssay）测定心肌细胞活性和病毒抑制率,流式细胞仪检测各组心肌细胞VEGF蛋白和F-actin平均荧光强度。 120只2 w～4 w SPF级BALB/c雄性小鼠随机等分为4组:正常对照组、虎杖甙对照组、病毒对照组和虎杖甙治疗组,每组30只,病毒对照组和虎杖甙治疗组每只小鼠均腹腔内注射CVB3病毒液制作病毒性心肌炎动物模型,另2组小鼠均腹腔注射不含病毒的Eagle’s液,于CVB3感染后3、7、10、14、21、30 d每组分别处死5只,摘眼球取血,无菌状态下取心脏、称重,观察各组小鼠的一般状况、心肌病理改变,计算心肌病变积分;空斑形成单位（PFU）法测定心肌组织病毒滴度;免疫组织化学法检测小鼠心肌组织VEGF蛋白表达情况,心肌组织切片进行CD34免疫组化染色,计数微血管密度;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组小鼠血清中VEGF水平;图像分析及统计学处理,数据经SPSS软件进行方差分析,P<0.05为显著性界限。
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标签：虎杖甙论文; 病毒论文; 柯萨奇病毒论文; 心肌细胞论文; 纤维状肌动蛋白论文; 细胞骨架论文; 病毒性心肌炎论文; 微血管密度论文;