CpG-ODNs与HSP-MUC1联用的抗肿瘤作用和HSP-HER2及其抗体ELISA检测方法的建立

论文摘要

CpG-ODN 是含有CpG 基序的寡聚脱氧核苷酸,能够激发机体产生Th1样免疫应答,在肿瘤治疗方面展现出广泛的应用前景。热休克蛋白65（HSP）-粘蛋白1（MUC1）抗原肽融合蛋白（HSP-MUC1）是我室研制的一种可诱生抗MUC1 高表达肿瘤免疫反应的重组融合蛋白。为研究自行设计的CpG-ODNs 是否对HSP-MUC1 的生物活性有增强作用,我们采用小鼠预防性和治疗性种植肿瘤模型发现:治疗性模型中,HSP-MUC1 和CpG-ODN 联用表现较好的抑瘤趋势;预防性模型中,HSP-MUC1 和CpG-ODN联用有显著的抑瘤作用。这些工作表明,联用CpG-ODN 可能提高HSP-MUC1对高表达MUC1 肿瘤的治疗和预防作用。此外,我室也研制了热休克蛋白-表皮细胞生长因子受体2（HER2/neu）抗原肽融合蛋白（HSP-HER2）,用来治疗高表达HER2 的肿瘤。为进行HSP-HER2 的药代和毒理研究,我们分别建立能有效检测HSP-HER2 及其抗体的ELISA 方法。

论文目录

• 引言
• 1.C pG-ODNs 抗肿瘤研究综述
• 1.1 CpG-ODN 的分子结构特征,作用机制及分类
• 1.1.1 CpG-ODN 的分子结构特征
• 1.1.2 CpG-ODN 的分类及各类的主要免疫学活性
• 1.1.3 CpG-ODN 的作用机制
• 1.2 CpG-ODN 在抗肿瘤方面的机制及应用
• 1.2.1 CpG-ODN 作为单独的抗肿瘤制剂
• 1.2.2 CpG-ODN 作为各种肿瘤疫苗的佐剂
• 1.2.3 CpG-ODN 与生物制剂或化疗药联合应用的抗肿瘤作用
• 2.H SP65-MUC1 和HSP-HER2 抗原肽疫苗简介
• 材料与方法
• 1. 主要材料与试剂
• 1.1 主要材料
• 1.1.1 CpG-ODNs
• 1.1.2 质粒与菌种
• 1.1.3 转染细胞模型
• 1.1.4 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.2.1 弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
• 1.2.2 ELISA 抗体
• 1.2.3 间接ELISA 和夹心ELISA 试剂
• 1.2.3 细胞裂解缓冲夜
• 1.2.4 Western Blotting 发光试剂盒
• 2. 主要方法
• 2.1 转染细胞鉴定
• 2.1.1 荧光显微镜检测
• 2.1.2 流式细胞测定技术
• 2.1.3 细胞Western Blotting
• 2.2 小鼠体内实验
• 2.2.1 治疗性模型-先瘤后药
• 2.2.2 预防性模型-先药后瘤
• 2.3 先瘤后药和先药后瘤小鼠抗体测定（间接法）
• 2.4 HSP-HER2 抗原检测方法的条件确定（夹心法）
• 2.4.1 检测多克隆抗体（豚鼠抗 3HER2-histag）的获得
• 2.4.2 包被多克隆抗体和检测多克隆抗体最佳稀释度的确定
• 2.4.3 标准曲线的绘制
• 2.5 HSP-HER2 抗体检测方法的条件确定（间接法）
• 2.5.1 HSP-HER2 蛋白诱导表达及纯化
• 2.5.2 阳性血清制备
• 2.5.3 最佳蛋白包板量和最佳血清稀释度的确定
• 2.5.4 待测样品检定
• 2.6 统计学检验
• 实验结果
• 1.C pG-ODNs 与HSP-MUC1 联用的抗肿瘤作用
• 1.1 MUC1-EL4 转染细胞的鉴定
• 1.1.1 荧光镜检
• 1.1.2 流式细胞测定
• 1.1.3 细胞Western Blotting
• 1.2 HSP-MUC11/CpG-ODNs 对 MUC1-EL4 肿瘤细胞生长的抑制作用（治疗性模型）
• 1.2.1 肿瘤生长曲线和肿瘤重量分布
• 1.2.2 荷瘤小鼠对HSP-MUC1 的体液免疫应答
• 1.3 HSP-MUC1/CpG-ODNs 对 MUC1-EL4 肿瘤细胞生长的抑制作用（预防性模型）
• 1.3.1 生存曲线
• 1.3.2 肿瘤发生曲线
• 1.3.3 肿瘤生长曲线和肿瘤体积中位数的时间曲线
• 1.3.4 荷瘤小鼠对HSP-MUC1 的体液免疫应答
• 2.H SP-HER2 及其抗体检测方法的建立
• 2.1 HSP-HER2 检测方法的建立
• 2.1.1 豚鼠抗3HER2-histag 多克隆IgG 效价确定
• 2.1.2 包被抗体和检测抗体最佳稀释度的确定
• 2.1.3 夹心法检测HSP-HER2 的ELISA 标准曲线
• 2.2 HSP-HER2 抗体检测条件的确定及应用
• 2.2.1 间接法检测HSP-HER2 抗体条件的确定
• 2.2.2 正常 C57BL/6 小鼠对 HSP-HER2 的体液免疫应答
• 讨论
• 1. CpG-ODNs 在HSP-MUC1/CpG-ODNs 中发挥抗肿瘤作用的机制
• 2. CpG-ODN 与 HSP-MUC1 联用的抗肿瘤作用在治疗性和预防性模型中的差异
• 2.1 总体效果的差异
• 2.2 各类 CpG-ODN 作用的差异
• 3. 关于荷瘤小鼠针对 HSP-MUC1 肿瘤疫苗的抗体
• 4. 关于双抗夹心 ELISA 方法检测 HSP-HER2
• 结论
• 附图和附表
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢
• 导师简介
• 作者简历