论文摘要
目的1.研究PGE2及其受体对结肠癌SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响。2.探讨PYK-2蛋白在PGE2诱导结肠癌细胞侵袭转移信号通路中可能的作用机制。方法1.采用常规细胞培养方法培养结肠癌细胞株SW480。2.RT-PCR检测SW480中PGE2四种EP（EP1,EP2,EP3,EP4）受体的表达及PGE2对各EP受体表达情况的影响。3.MTT法测定SW480细胞黏附能力。4.Transwell迁移实验检测SW480细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测SW480细胞侵袭能力。5.Western blotting检测PGE2对SW480细胞中PYK-2蛋白磷酸化水平的影响。6.Western blotting检测PGE2+SC19220（EP1抑制剂）组,PGE2+BAPTA-AM(胞内Ca2+螯合剂)组与PGE2组相比,SW480细胞中PYK-2蛋白磷酸化水平的变化。结果1.SW480细胞中,EP1,EP2,EP4都有表达,EP3无表达。加入PGE2后,EP1表达增加（P＜0.05）,其他受体的表达均无显著变化。2.PGE2作用于细胞后,黏附细胞OD值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞数由84.33±5.13增加至144.00±12.53,侵袭细胞数由42.67±3.05增加至86.00±7.00,差异均有统计学意义（P＜0.05）。提示外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭细胞数量。3.PGE2+SC19220组PGE2组相比,黏附细胞OD值由0.417±0.088下降至0.140±0.011,迁移细胞数由144.00±12.53下降至110.67±10.06,侵袭细胞数由86.00±7.00下降至59.67±5.69,差异均有统计学意义（P＜0.05）。提示PGE2的EP1受体拮抗剂SC19220可显著减少PGE2所诱导的黏附、迁移及侵袭细胞数量。4.结肠癌SW480细胞中,可检测到较弱的磷酸化PYK-2的表达,经PGE2作用后,10min内PYK-2磷酸化水平随时间逐渐增加,30min检测基本降至基础水平。半定量分析各时间点磷酸化PYK-2相对水平,0min,5min,10min的PYK-2磷酸化水平之间差异有统计学意义（P＜0.05）,30min与0min检测结果之间无统计学差异（P＞0.05）。5.PGE2+SC19220组、PGE2+BAPTA-AM组与PGE2组相比,PYK-2蛋白磷酸化水平下降（P＜0.05）。结论1.PGE2可能通过EP1促进SW480细胞黏附、迁移及侵袭。2.PGE2可能通过Ca2+,EP1促进PYK-2的磷酸化,从而进一步激活依赖Src的EGFR信号通路,诱导结肠癌细胞的侵袭转移过程。
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