胰岛素样生长因子-Ⅰ抑制体外培养的兔软骨细胞凋亡及对细胞内游离钙影响的实验研究

论文摘要

一、兔软骨细胞的分离、培养和生物学特性研究目的:获得均一性的兔软骨细胞。方法:机械分离乳兔关节软骨,分切为约1 mm3,用0.2%Ⅱ型胶原酶消化6h,以DMEM培养基体外培养,并以Ⅱ型胶原免疫组化染色以及Giemsa染色方法进行鉴定。结果:应用Ⅱ型胶原免疫组化染色和Giemsa染色呈阳性,软骨细胞体外培养生长良好。结论:本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好.适合于实验研究;软骨细胞5代培养后,细胞表型发生改变。二、软骨细胞二种凋亡模型的建立目的:为了观察药物对骨关节炎中软骨细胞凋亡的影响建立了软骨细胞二种凋亡模型。方法:将硝普钠（SNAP）、全反式维甲酸（ATRA）分别加入软骨细胞培养体系,建立二种不同药物诱导的软骨细胞凋亡模型采用吖叮橙荧光染色、DNA电泳、Annexin v/PI双参数法以及透射电镜对软骨细胞凋亡进行定量、定性检测。结果:在兔软骨细胞培养体系中分别加入2 mmol/L,SNAP,10-4mol/L,ATRA 24 h后均可成功建立软骨细胞凋亡模型。结论:提示硝普钠、全反式维甲酸加入软骨细胞培养体系中,可建立软骨细胞凋亡模型。三、胰岛素样生长因子-Ⅰ抑制体外培养的兔软骨细胞凋亡及bcl-2、caspase-3蛋白表达的研究目的:探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-Ⅰ）对SNAP、ATRA诱导软骨细胞凋亡及bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响,揭示其抗损伤作用机制,为骨关节炎治疗提供理论依据。方法:制作兔软骨细胞凋亡模型。给予IGF-Ⅰ10ug/L、100ug/L,应用免疫组化染色和TUNEL法检测bcl-2,caspase-3蛋白表达及软骨凋亡细胞。结果:与凋亡组比较,IGF-Ⅰ治疗组的凋亡细胞数明显减少,bcl-2蛋白表达明显升高,caspase-3蛋白表达明显降低。结论:IGF-Ⅰ通过增加bcl-2蛋白表达,减少caspase-3蛋白表达,减少软骨细胞凋亡,对骨关节炎起保护作用。四、对SNAP、ATRA引起的兔软骨细胞内钙动员拮抗作用的实验研究目的:研究胰岛素样生长因子-Ⅰ对SNAP、ATRA引起的兔软骨细胞动员的影响.方法:应用萤光指示Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度并用公式计算:[Ca2’]I=keff×（R-Rmin）/（Rmax-R）.结果:100μg/L IGF-Ⅰ可以抑制ATRA.10-4mol/L及SNAP2mmol/L引起的钙动员（P<0.01）.结论:SNAP和ATRA在体外能诱导兔软骨细胞调亡.IGF-Ⅰ能阻碍细胞钙离子浓度上升,提示可能是治疗骨关节炎的机制之

论文目录

• 一、前言
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、正文
• 第一部分 兔软骨细胞的分离、培养和生物学特性研究
• 第二部分 软骨细胞二种凋亡模型的建立
• 第三部分 胰岛素样生长因子-I抑制体外培养的兔软骨细胞凋亡及bcl-2、caspase-3蛋白表达的研究
• 第四部分 对SNAP、ATRA引起的兔软骨细胞内钙动员拮抗作用的实验研究
• 五、综述
• 六、参考文献
• 七、致谢