影响小鼠核移植胚发育因素的研究

论文摘要

细胞核移植的成功率受诸多因素的影响。除维持重构卵核的正确倍性及其重新程序化的影响外,卵母细胞的处理方法、显微操作技术、不同的胞质受体与不同的供体细胞及其状态对重构胚的发育有着重要的影响。本实验采用MⅡ期卵母细胞作为受体和颗粒细胞作为供体,对小鼠核移植技术中影响重组胚的相关因素进行了研究,其结果如下。 1、用透明质酸酶处理卵丘卵母细胞复合体时,其浓度和处理时间均对重组胚的发育产生影响。当透明质酸酶浓度为150μg/ml并用移卵管反复吹打2min时,可获得较好的重组胚发育率（80.8%）。 2、本实验比较了电激活不同参数及卵龄对卵母细胞激活的影响。 相同脉冲强度、脉冲宽度、脉冲次数下,卵龄为17h的卵母细胞获得较高的激活率（71.7%）和发育率（84.8%/39.4%）。 在相同卵龄、脉沖脉宽、脉冲次数下,脉冲强度为100V/mm时卵母细胞的激活率为最高（72.7%）,2-细胞、囊胚发育率也达到峰值（85.0%/35.0%）,为适宜卵母细胞激活脉冲强度。 在相同卵龄、脉冲强度、脉冲次数下,当脉冲宽度为80μs时卵母细胞的激活率达到了最高（76.7%）,2-细胞、囊胚发育率也达到峰值（80.4%/34.8%）,为适宜的卵母细胞激活脉宽度数。 在相同卵龄、脉冲强度、脉冲宽度下,3次脉沖的激活率高于2次,但激活后的2-细胞、囊胚发育率2次脉冲（70.3%/29.7%）高于3次。因此2次为适宜卵母细胞激活脉沖次数。 与电激活（74.5%）相比SrC12激活法可以获得较高的激活率（78.0%）,但激活后的2-细胞、囊胚发育率低于电激活法（67.6%/21.6%）,仅为（52.8%/08.3%）。 3、在核移植的3种不同类型核质组合中。类型Ⅰ和类型Ⅱ的重组胚继续培养出现了桑椹胚和囊胚的发育。第二种类型组合比第一种类型组合的胚胎发育率低。类型Ⅲ的2-细胞发育率较低和前两种类型相比具有显著的差异（a:b<0.01a:C<0.01）,并且没有出现桑囊发育。

论文目录

• 前言
• 1 本实验研究的目的与意义
• 2 哺乳动物核移植的研究进展
• 3 哺乳动物核移植相关理论的研究
• 4 哺乳动物核移植的方法研究
• 5 哺乳动物核移植的发展前景及应用
• 6 哺乳动物核移植中存在的问题
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 试剂的配置
• 2.2 卵母细胞的获得
• 2.3 颗粒细胞的获得
• 2.4 显微操作针的制备
• 2.5 卵母细胞的去核
• 2.6 核移植的显微操作
• 2.7 激活与融合
• 2.8 重组胚胎培养
• 2.9 实验数据处理
• 小鼠颗粒细胞核移植操作流程图
• 结果与分析
• 1 透明质酸酶浓度及处理时间对核移植配发育的影响
• 2 透明质酸酶处理时卵丘卵母细胞复合体的形态变化
• 3 卵龄对小鼠卵母细胞电激活及孤雌活化的影响
• 4 不同脉冲强度对小鼠卵母细胞电激活及孤雌活化的影响
• 5 不同脉冲宽度对小鼠卵母细胞电激活及孤雌活化的影响
• 6 直流脉冲数对小鼠卵母细胞电激活及孤雌活化的影响
• 7 电激活方法和化学激活方法效果的比较
• 8 不同核质组合类型对小鼠颗粒细胞核移植胚发育的影响
• 讨论
• 1 供体和受体细胞的收集过程中存在的问题
• 2 卵母细胞孤雌活化
• 3 显微操作中存在的问题
• 4 孤雌发育对核移植的影响
• 5 不同核质组合的核移植效果
• 结论
• 参考文献
• 附录图
• 缩略语
• 致谢
• 作者简历