蛇床子素对博莱霉素致肺纤维化动物的干预作用及其机制研究

论文摘要

目的:观察蛇床子素（Osthole,Ost）对博莱霉素（BLM）致肺纤维化动物模型的干预作用,并探讨其抗肺纤维化作用机制。方法:昆明小鼠及SD大鼠分别随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组与蛇床子素大、中、小剂量组。通过气管内一次性滴注博莱霉素小鼠（5mg/kg）、大鼠（4.5mg/kg）复制肺纤维化动物模型。造模第2d起,各治疗组给予相应剂量药物灌服治疗,正常对照组及模型组给予1ml/100g的5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。各实验组动物于给药后28d处死,取肺组织称取肺湿重,计算肺系数:肺湿重（mg）/体重（g）;取部分肺组织进行HE染色及透射电镜观察,观察其病理形态,并参照Szaopiel等方法对肺泡炎和肺纤维化程度进行评分;测定肺组织及血清中羟脯氨酸（Hydroxyproline,HYP）、丙二醛（Malondialdehyde, MDA）、总抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity,T-AOC）、谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、一氧化氮合酶（Nitricoxide Synthase,NOS）、抑制羟自由基（Hydroxy radical,·OH）能力的水平;应用免疫组织化学技术,检测转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1,TGF-β1）、Ⅲ型胶原蛋白（Collagen III,Col-III）、α-平滑肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）在肺组织中的表达;半定量RT-PCR检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4mRNA的表达;免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）、小窝蛋白-1（Caveolin,Cav-1）、骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）的表达。结果:（1）蛇床子素可不同程度地抵抗BLM所致小鼠、大鼠的体重减轻并降低肺系数。（2）蛇床子素可显著降低肺纤维化大、小鼠肺组织HYP的含量（P<0.001）。（3）肺组织及血清生化指标测定结果显示,蛇床子素可显著降低MDA的含量和NOS的活力（P<0.05,P<0.01）,提高T-AOC和抑制·OH能力、升高GSH的含量（P<0.05,P<0.01, P<0.001）。（4）光镜和电镜观察结果显示,给予蛇床子素干预的小鼠、大鼠的肺泡炎程度、肺纤维化程度和超微结构改变明显减轻（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。（5）免疫组织化学结果显示,蛇床子素能显著抑制肺纤维化小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMA和Col III蛋白的表达（P<0.01,P<0.001）。（6）肺组织RT-PCR结果显示蛇床子素可显著下调肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）。（7）肺组织Western-blot结果显示蛇床子素可显著提高肺纤维化大鼠肺组织中Cav-1蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）,降低α-SMA、OPN蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。结论:蛇床子素对博莱霉素所致小鼠、大鼠肺纤维化有一定的干预作用,其机制可能与其抑制TGF-β1/Smads信号转导通路、抑制肺组织Col-Ⅲ沉积、下调肺纤维化正相关蛋白α-SMA、OPN的表达及上调肺纤维化负相关蛋白Cav-1的表达从而发挥抗炎、抗氧化、清除自由基及抗成纤维细胞增殖的作用有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、肺纤维化研究的现状
• 二、蛇床子素的药理学作用
• 第一部分 蛇床子素对博莱霉素致肺纤维化小鼠的干预作用
• 材料与方法
• 实验方法
• 统计学处理
• 结果
• 小结
• 附图
• 第二部分 蛇床子素对博莱霉素致肺纤维化大鼠的干预作用
• 材料与方法
• 结果
• 小结
• 附图
• 第三部分 蛇床子素对肺纤维化大鼠相关基因和蛋白表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 小结
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表论文
• 中英文缩略词表
• 致谢