论文摘要
杏花雨注射液是新研制的银杏叶提取物注射液,提取物中黄酮苷含量为49.79%,萜烯为4.4%。已有许多文献报道黄酮类化合物有较好的抗肿瘤活性,杏花雨注射液中含有丰富的黄酮类物质,含量居各类物质之首。因此,其在抗肿瘤方面可能具有很大潜力。本实验旨在通过研究杏花雨注射液对肝癌（H22）模型小鼠肿瘤生长的影响,并初步探讨其作用机制,从而为其更好的应用于临床提供客观而科学的依据。目的:观察杏花雨注射液对肝癌（H22）模型小鼠的抑瘤作用并对其作用机制进行研究。方法:⑴抑瘤作用的研究:取生长7天的肝癌H22腹水型小鼠颈椎脱臼处死,固定于蜡盘上,用无菌空针刺破腹腔,吸取乳白色腹水,用无菌生理盐水稀释,混合均匀制备瘤细胞悬液,调整肿瘤细胞浓度为1×107/ml备用。取昆明种小鼠50只,右前肢腋窝下常规消毒,每鼠皮下注射瘤细胞悬液0.2ml。按体重随机分为模型对照组、杏花雨注射液17.5mg/kg、35mg/kg、70mg/kg剂量组,以及环磷酰胺（20mg/kg）阳性对照组,每组10只小鼠。接种24h后开始给药,腹腔注射每天一次,给药容积为0.2ml/10g,连续7天,模型对照组给予同等容积的生理盐水。于末次给药后24h,颈椎脱臼处死小鼠,剥出瘤块称重,计算抑瘤率。⑵增效作用的研究:瘤细胞悬液的制备方法同前,取昆明种小鼠40只,右前肢腋窝下常规消毒,每鼠皮下注射瘤细胞悬液0.2ml。按体重随机分为模型对照组、杏花雨注射液17.5mg/kg剂量组、环磷酰胺（5mg/kg）组、合用组,每组10只小鼠。杏花雨注射液采用腹腔注射,环磷酰胺（5mg/kg）采用皮下注射,每天一次,给药容积为0.2ml/10g,连续7天,模型对照组给予等量的生理盐水。于末次给药后24h,颈椎脱臼处死小鼠,剥出瘤块称重,计算抑瘤率。⑶作用机制研究:采用MTT比色法测定荷瘤小鼠脾脏NK细胞的活性, ELISA法检测荷瘤小鼠血清中白细胞介素2（IL-2）及肿瘤坏死因子（TNF-α）的浓度,以及免疫组织化学法检测瘤组织MVD及VEGF水平的表达。结果:⑴抑瘤作用:杏花雨注射液可以显著的抑制荷瘤（H22）模型小鼠肿瘤的生长,17.5mg/kg、35mg/kg、70mg/kg剂量组的抑瘤率分别为22.60%、48.84%、40.22%（P<0.01）,环磷酰胺的抑瘤率为57.12%（P<0.01）。⑵增效作用:杏花雨注射液17.5mg/kg剂量组、环磷酰胺（5mg/kg）组、以及合用组抑瘤率分别为18.07%、23.88%、34.59%（P<0.01）,可见两者合用的抑瘤作用好于两者单用。⑶对NK细胞活性的影响:杏花雨注射液可以显著的提高荷瘤小鼠脾脏NK细胞的活性,模型对照组与杏花雨三个剂量组对肿瘤（H22）细胞的杀伤率分别为:（43.58±6.95）%、（67.21±3.91）%、（75.06±4.70）%、（72.25±6.94）%,可见杏花雨注射液三个剂量组的杀伤率均高于模型对照组（P<0.01）。⑷对荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α浓度的影响:杏花雨注射液能够显著提高荷瘤小鼠血清中IL-2和TNF-α的浓度,模型对照组、杏花雨注射液三个剂量组及环磷酰胺（20mg/kg）组荷瘤小鼠血清中IL-2浓度分别为:34.23±4.55pg/ml、38.57±8.33pg/ml、42.34±7.41pg/ml、41.60±7.76pg/ml、25.35±7.70pg/ml,杏花雨注射液35mg/kg剂量组高于模型对照组（ P < 0.05 ）;以上各组TNF-α浓度分别为:24.00±6.93pg/ml、30.77±6.07pg/ml、53.25±10.69pg/ml、51.61±9.10pg/ml、14.35±2.95pg/ml,杏花雨注射液35mg/kg、70mg/kg剂量组均高于模型对照组（P<0.01）,而环磷酰胺（20mg/kg）组荷瘤小鼠血清中IL-2和TNF-α浓度均低于模型对照组（P<0.05）。⑸对肿瘤组织微血管形成的影响:杏花雨注射液可以抑制肿瘤组织微血管的形成,模型对照组、杏花雨注射液三个剂量组及环磷酰胺（20mg/kg）组的肿瘤组织微血管密度（MVD）分别为:35.48±5.36、30.40±2.43、22.72±2.18、29.74±3.53、18.78±1.73,血管内皮生长因子（VEGF）表达平均染色强度分别为:2.06±0.33、1.62±0.27、1.58±0.26、1.60±0.32、1.54±0.35,其中杏花雨注射液35mg/kg剂量组及环磷酰胺（20mg/kg）组与模型对照组比较具有显著性差异（P<0.05）。结论:⑴杏花雨注射液能够显著的抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并且提高环磷酰胺的抑瘤效果。⑵其体内抗肿瘤作用与增强荷瘤小鼠机体的免疫功能,降低MVD和VEGF有关。
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标签：杏花雨注射液论文; 抗肿瘤论文; 细胞论文; 血管生成论文; 血管内皮生长因子论文;