酿酒大麦种质资源AFLP分子指纹图谱构建

论文摘要

大麦是世界上最古老的作物之一,种植总面积和总产量仅次于水稻、小麦、玉米,居第四位,主要用作啤酒工业原料、饲料、粮食以及医药工业原料和保健食品。大麦品质及纯度直接影响到了啤酒的口感和品质,对啤酒行业的健康发展产生一定影响,所以,建立一套快速准确的检测方法,为鉴定和筛选优良高产的大麦种质起到重要作用。本研究采用AFLP分子标记技术对27份国内外酿酒大麦种质资源进行了实验,希望从分子水平揭示其种间差异,为我国大麦种质资源鉴定及啤酒行业做出积极贡献。研究取得了如下进展：1、通过不同方法的比较,找出最适用于大麦种质DNA提取方法,利用植物基因组试剂盒所提取的DNA纯度高,完全适于AFLP技术分析的实验研究。2、建立了大麦种质分析的AFLP技术体系：在20μL酶切连接体系中,包括基因组DNA（50ng/μL）5μL,EcoR I1OU/μL0.5μL,Mse I10U/μL0.5μL,10×Tango buffer3μL, T4DNAligase（5U/μL）0.2μL,37℃和65℃分别酶切4h后加入接头Adapter1μL,22℃连接10分钟；预扩产物稀释20倍进行选择性扩增；加入8μL loading buffer95℃变性5分钟后,选扩产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳和银染程序。3、采用E+3/M+3引物组合进行实验,得到的扩增条带数目适中,电泳图谱清晰。从64对引物中筛选到3对带型清晰、多态性较高的引物组合,并构建了27种国内外酿酒大麦种质的AFLP指纹图谱。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 大麦概述
• 1.1.1 大麦起源与发展
• 1.1.2 大麦种类
• 1.1.3 大麦的市场用途
• 1.1.4 中国优质酿酒大麦基地
• 1.2 DNA分子标记技术
• 1.2.1 DNA分子标记技术的发展
• 1.2.2 DNA分子标记的特点
• 1.2.3 DNA分子标记的种类
• 1.2.3.1 SSR（简单重复序列）
• 1.2.3.2 ISSR（简单重复序列间区）
• 1.2.3.3 RAPD（随机扩增多态性DNA）
• 1.2.3.4 AFLP（扩增片段长度多态性）
• 1.2.3.5 EST（表达序列标签）
• 1.2.3.6 SNP（单核苷酸多态性）
• 1.3 AFLP技术原理、流程和特点
• 1.3.1 AFLP技术的发展及其基本原理
• 1.3.2 AFLP技术流程及关键
• 1.3.3 AFLP技术优势及缺点
• 1.3.3.1 AFLP技术优势
• 1.3.3.2 AFLP技术缺点
• 1.4 DNA分子标记技术在大麦种质鉴定中的应用
• 1.4.1 图谱构建
• 1.4.2 种质鉴定
• 1.4.3 分子标记辅助选择
• 1.5 本文研究意义、内容
• 1.5.1 研究意义
• 1.5.2 研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验试剂及仪器
• 2.2.1 实验试剂
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 大麦种子萌发
• 2.3.2 DNA模板的制备
• 2.3.2.1 CTAB法提取样品基因组DNA
• 2.3.2.2 天根植物基因组DNA试剂盒提取步骤
• 2.3.2.3 北京鼎国植物基因组DNA试剂盒提取步骤
• 2.3.2.4 基因组DNA的检测
• 2.3.2.5 样品DNA的保存
• 2.3.3 AFLP分子标记分析
• 2.3.3.1 限制性内切酶组合及引物类型的选择
• 2.3.3.2 酶切、连接及预扩增模板的准备
• 2.3.3.3 预扩增反应
• 2.3.3.4 选择性扩增
• 2.3.3.5 变性
• 2.3.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
• 2.3.4.1 变性聚丙烯酰胺凝胶的制备
• 2.3.4.2 选扩产物的电泳分析
• 2.3.4.3 AFLP银染程序
• 第三章 结果与分析
• 3.1 大麦基因组DNA的提取
• 3.2 酶切及接头连接效果检测
• 3.3 预扩增产物检测
• 3.4 预扩增产物稀释倍数比较
• 3.5 引物的筛选
• 3.6 选扩结果
• 3.7 AFLP数据分析及指纹图谱的构建
• 3.7.1 国产酿酒大麦种质资源AFLP指纹图谱构建
• 3.7.2 进口酿酒大麦种质资源AFLP指纹图谱构建
• 3.7.3 27种国内外酿酒大麦AFLP指纹图谱构建
• 3.8 讨论
• 3.8.1 影响AFLP技术的关键因素
• 3.8.1.1 大麦基因组总DNA的提取
• 3.8.1.2 关于内切酶组合的讨论
• 3.8.1.3 关于选扩引物及连接效率的讨论
• 3.8.1.4 两次PCR扩增体系对AFLP的影响
• 3.8.2 关于电泳
• 3.8.3 关于银染
• 3.8.4 关于AFLP分子标记技术用于大麦种质鉴定的可行性
• 3.8.5 啤酒大麦指纹图谱构建过程的相关问题
• 3.8.6 构建大麦种质指纹图谱的现实意义
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢