论文摘要
本文以生长发育正常、健康状况良好的20 日龄雄性SD 大鼠为实验动物,采用脂肪细胞离体培养技术分离培养大鼠前体脂肪细胞,以不同浓度的花生四烯酸（AA）和二十二碳六烯酸（DHA）处理细胞,分析了AA 和DHA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响,并比较了不同浓度AA 和DHA 对前体脂肪细胞分化过程中过氧化物酶增殖物活化受体-γ2（PPAR-γ2）及环氧合酶-2（COX-2）基因mRNA 表达的调控, 为进一步阐明AA 和DHA 两种多不饱和脂肪酸（PUFA）在脂肪细胞增殖与分化中的作用机理提供理论依据。利用台盼兰排斥试验、噻唑蓝比色法（MTT）、Hoechst33342 荧光染色、流式细胞术测细胞周期法等实验技术分别检测了不同浓度AA 和DHA 对大鼠前体脂肪细胞活力、细胞周期及凋亡的影响。台盼兰排斥试验和MTT 结果均表明,AA 促进大鼠前体脂肪细胞活力,120 μmol/L的AA 促增殖作用较40、80、160 μmol/L三种浓度显著（P<0.01）;经检测,AA 可减少前体脂肪细胞中G1 细胞比例,增加PrI 期细胞比例,120 μmol/L的AA 与对照组相比,差异极显著（P<0.01）;160 μmol/L的AA 作用48h后,可诱导前体脂肪细胞发生凋亡,导致此浓度的AA 促增殖效果降低（P>0.05）。与对照组相比,DHA对大鼠前体脂肪细胞的增殖有一定抑制作用,160 μmol/L DHA作用显著（P<0.05）。通过细胞形态观察、油红O 染色、香草醛测总脂法和考马斯亮蓝测总蛋白等方法分析不同浓度AA 和DHA对大鼠前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:低浓度AA（40-80 μmol/L）可降低细胞内脂肪生成量,抑制前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化,80 μmol/L AA 作用效果显著（P<0.01）,而高浓度AA（160 μmol/L）则对细胞的分化起促进作用;DHA 以浓度依赖性抑制脂肪细胞分化,160 μmol/L DHA抑制作用较40、80、120 μmol/L三种浓度显著（P<0.05）。采用半定量RT-PCR 技术分析40 μmol/L、160 μmol/L两种浓度的AA 和DHA对大鼠脂肪细胞中PPARγ2 和COX-2 mRNA表达的影响。结果显示:低浓度AA（40 μmol/L）和高浓度DHA（160 μmol/L）均可下调PPARγ2 mRNA表达,160 μmol/L DHA作用极显著（P<0.01）,但二者对COX-2 mRNA 的表达均有上调作用, 40 μmol/L AA 作用显著（P<0.01）;高浓度AA（160 μmol/L）和低浓度DHA（40 μmol/L）均显著抑制COX-2 mRNA的表达（P<0.01）。