注射用冠心宁（冻干）质量控制方法与药物动力学研究

论文摘要

本研究以部颁标准收载抗心脑血管疾病中药冠心宁注射液为研究对象，对其制剂工艺、质量控制方法和有关成分药物动力学进行了初步研究，内容如下：采用单因素轮换法和正交试验设计方法，对注射用冠心宁（冻干）提取工艺进行优化。分别以丹酚酸B和阿魏酸为考察指标，对药材粒度、提取溶剂用量、提取时间和提取次数几个因素进行优化，确定了注射用冠心宁（冻干）中各组成药味的最佳提取工艺。此外对醇沉条件、萃取条件、活性炭用量和真空冷冻干燥条件等进行考察，确定了制剂生产工艺条件。结果表明，本研究所建立的冻干粉针工艺合理，适用性好，制成的冻干粉针呈浅黄色至棕色疏松状固体，含水量低，加水后能迅速溶解且分散均匀。依照《中国药典》2005年版对中药注射剂有关规定，对粉针热原、无菌、重金属等项进行了检查，提高了制剂安全性。采用紫外分光光度法对注射用冠心宁（冻干）中丹参总酚酸类成分进行鉴别，方法简便、易行、可靠。选用薄层色谱法对注射用冠心宁（冻干）中的阿魏酸进行定性鉴别，方法简便，重复性好，专属性强。建立了该制剂的HPLC指纹图谱质量评价方法。采用Luna C18色谱柱（250 mm×4．6 mm，5μm），以乙腈-pH2．59的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，以丹酚酸B为参照物，建立了HPLC指纹图谱鉴别方法。采用相同色谱条件对制剂组方药材的HPLC指纹图谱进行研究，确立了组方药材推荐品产地。并对制剂、药材、中间体HPLC指纹图谱相关性进行了研究，研究结果表明药材、中间体与制剂间相关性良好。所建立的方法能有效控制该制剂与中间体的质量。采用HPLC法测定了注射用冠心宁（冻干）中丹酚酸B和阿魏酸含量。选用Hypersil ODS2 C18色谱柱（250 mm×4．6 mm，5μm），柱温为28℃，流动相为甲醇-乙腈-1．7％甲酸水溶液（11：12：77，v／v／v），丹酚酸B在1．70～25．47μg·mL-1和阿魏酸在0．05～0．68μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，平均回收率分别为101．1％（RSD=2．9％）和99．2％（RSD=2．8％）；采用HPLC法同时测定了注射用冠心宁（冻干）中的丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸和丹酚酸B含量，选用Luna C18色谱柱（250 mm×4．6 mm，5μm），柱温为35℃，以乙腈-0．05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，各组分线性关系良好，平均回收率为96．3～104．3％，RSD<3．5％。所建立的方法为有效控制该制剂质量提供了依据。采用相同色谱条件，同时测定了原注射液中各组分含量，对粉针与注射液有效成分含量进行了比较，结果发现新剂型总有效成分含量高于原注射液，证明了改变剂型和工艺的必要性。建立了测定大鼠血浆中阿魏酸和异阿魏酸含量的HPLC-UV分析方法，以香豆素为内标，甲醇为沉淀蛋白试剂，阿魏酸在5．780～5780 ng·mL-1和异阿魏酸在1．740～348．0 ng·mL-1范围内线性关系良好。方法的定量下限分别为5．780ng·mL-1和1．740 ng·mL-1，日内日间精密度RSD≤14．9％，准确度RE在-5．8％～4．0％范围内，平均回收率阿魏酸为85．1％（RSD=1．6），异阿魏酸为91．1％（RSD=1.5）。测定了阿魏酸和异阿魏酸的血药浓度-时间曲线，并计算了相应的药物动力学参数，阿魏酸与异阿魏酸t1／2分别为0．570±0．427 h和2．571±1．992 h，Cmax分别为315．4±181．1 ng·mL-1和126．1±71．36 ng·mL-1，tmax分别为0．033±0 h和0．044±0．027 h。同时，对注射用冠心宁（冻干）不同注射给药方式进行了比较研究，结果表明，肌肉注射后阿魏酸绝对生物利用度为82．6％，异阿魏酸为73．2％。建立了同时测定大鼠血浆中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸和丹酚酸B含量的LC-MS分析方法，以没食子酸为内标，血浆经甲醇沉淀蛋白，乙酸乙酯-乙醚（3：1，v／v）萃取后，采用ESI源负离子，选择离子监测法（SIM）进行分析。各被测成分分别在0．342～85．0μg·mL-1，0．0647～12．9μg·mL-1，0．0933～18．7μg·mL-1，0．0085～3．40μg·mL-1，0．0138～2．75μg·mL-1和0．0272～810μg·mL-1范围内线性关系良好。定量下限分别为0．342μg·mL-1，0．0647μg·mL-1，0．0933μg·mL-1，0．0085μg·mL-1，0．0138μg·mL-1和0．0272μg·mL-1，日内日间精密度分别为RSD≤10．0％，准确度RE在-3．7％～5．0％范围内，平均回收率分别为86．8％（RSD=4．8），85．6％（RSD=2．1），78．1％（RSD=4．4），76．5％（RSD=4．3），84．7％（RSD=3．5）和82．3％（RSD=4．0）。静脉给予注射用冠心宁（冻干）后，大鼠血浆中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸和咖啡酸消除较快，t1／2≤0．419 h；丹酚酸B消除相对较慢，t1／2为1．18 h。同时，对注射用冠心宁（冻干）和冠心宁注射液经静脉注射后在大鼠体内的生物等效性进行了比较研究，结果表明，粉针与注射液生物不等效，粉针在大鼠体内吸收程度高于原注射液。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 冠心宁注射液的研究概况
• 1.1.1 冠心宁注射液处方与功效
• 1.1.2 冠心宁注射液组成药味概述
• 1.2 本研究立题依据与思路
• 第二章 注射用冠心宁（冻干）制剂工艺研究
• 2.1 提取方法与优化
• 2.1.1 药材粒度考察
• 2.1.2 提取条件选择
• 2.1.3 醇沉条件考察
• 2.1.4 活性炭用量选择
• 2.1.5 萃取条件考察
• 2.1.6 溶液pH值选择
• 2.2 冷冻干燥工艺考察
• 2.2.1 支持剂选择
• 2.2.2 冷冻干燥条件选择
• 2.3 讨论
• 第三章 注射用冠心宁（冻干）质量控制方法研究
• 3.1 注射用冠心宁（冻干）鉴别
• 3.1.1 丹参
• 3.1.2 川芎
• 3.2 注射用冠心宁（冻干）检查
• 3.2.1 pH值
• 3.2.2 澄明度
• 3.2.3 重金属
• 3.2.4 砷盐
• 3.2.5 无菌
• 3.2.6 热原
• 3.2.7 有关物质
• 3.3 注射用冠心宁（冻干）指纹图谱研究
• 3.3.1 注射用冠心宁（冻干）色谱指纹图谱研究
• 3.3.2 丹参药材色谱指纹图谱研究
• 3.3.3 川芎药材色谱指纹图谱研究
• 3.3.4 丹参、川芎药材与中间体、制剂的相关性研究
• 3.4 注射用冠心宁（冻干）含量测定方法
• 3.4.1 注射用冠心宁（冻干）中主要酚类成分同时含量测定方法
• 3.4.2 注射用冠心宁（冻干）中丹酚酸B和阿魏酸含量测定方法
• 3.5 讨论
• 第四章 注射用冠心宁（冻干）药物动力学研究
• 4.1 阿魏酸和异阿魏酸的药物动力学
• 4.1.1 血浆样品中阿魏酸与异阿魏酸分析方法的建立
• 4.1.2 静脉注射给予注射用冠心宁（冻干）后阿魏酸和异阿魏酸药动学结果
• 4.1.3 不同注射方式给予注射用冠心宁（冻干）后阿魏酸和异阿魏酸药动学研究
• 4.1.4 讨论
• 4.2 丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸和丹酚酸B的药物动力学
• 4.2.1 血浆样品中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸和丹酚酸B同时测定分析方法的建立
• 4.2.2 静脉注射给予注射用冠心宁（冻干）后丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸和丹酚酸 B的药动学结果
• 4.2.3 静脉注射给予注射用冠心宁（冻干）及注射液后丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸和丹酚酸B的药动学研究
• 4.2.4 讨论
• 第五章 结果与讨论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简历