论文摘要
深度烧伤创面愈合后常伴随有增生性瘢痕形成,但是对参与增生性瘢痕发生发展的基因及其调控机制目前尚未完全清楚。我们曾经利用基因芯片技术筛选烧伤后早期增生性瘢痕组织与同体正常皮肤组织的差异表达基因研究,找出了97条相关基因。对这些相关基因利用生物信息学一一分析后发现Genebank ID hsu36189的代表基因p311在早期增生性瘢痕组织中呈显著的差异表达,而p311基因的表达在成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中起着重要作用。那么,该基因的编码蛋白P311在纤维化形成、瘢痕发生发展过程中的作用是什么,其作用靶点是什么?这些问题鲜见文献报道。为此,我们结合蛋白组学研究内容与技术,利用酵母双杂交系统,以融合Gal4 DNA结合区（DNA binding domain, DBD）的P311为诱饵蛋白,筛选了成人肝cDNA文库,以期得到与P311相互作用蛋白的编码基因序列,为进一步的工作奠定基础。主要内容和研究结果如下:1.诱饵基因的验证p311经PCR扩增、纯化后连接至T载体pTZ57R/T,转化DH5α进行蓝白斑筛选阳性菌落并扩增、抽提质粒测序鉴定p311序列正确。2.诱饵重组质粒构建与转化以NdeⅠ?BamHⅠ同时双酶切p311 PCR产物和含BD结合域的质粒pGBKT7,回收产物并连接,转化DH5α通过抗性筛选获得阳性细菌克隆,对其进行扩增、提取质粒并利用PCR、酶切和测序鉴定pGBKT7-p311构建成功后,采取醋酸锂法转化感受态酵母菌株AH109,通过缺陷型培养基SD/-Trp筛选阳性克隆,并经PCR再次鉴定正确后保存菌种备用。3.文库筛选按照Clontech公司的操作手册通过酵母交配实验从预转的成人肝cDNA文库中筛选能够与P311相互作用的阳性克隆。筛选前以pGBKT7空载体作为对照质粒,完成pGBKT7-p311的毒性实验、自激活实验。然后将含有pGBKT7-p311的酵母菌株AH109与含有肝cDNA文库的酵母菌株Y187进行交配后在缺陷型培养基上逐步完成四轮筛选,共获取阳性克隆98个。对98个阳性克隆利用BD、AD载体引物进行PCR鉴定后,得到同时含有诱饵和文库序列的阳性克隆55个。最终从55个阳性克隆中成功提取出40个阳性文库质粒。经转化DH5α、抗性筛选、提取质粒并测序、分类整理后,确认所有阳性克隆均无自激活作用,并与pGBKT7-p311互换宿主
论文目录
相关论文文献
- [1].乙型肝炎X相互作用蛋白在头颈鳞状细胞癌中表达与定位分析[J]. 临床军医杂志 2020(09)
- [2].大肠埃希菌蛋白质组芯片对砷相互作用蛋白的检测分析[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2017(05)
- [3].人音猬因子相互作用蛋白基因与慢性阻塞性肺疾病[J]. 现代生物医学进展 2015(19)
- [4].蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51的研究进展[J]. 国际口腔医学杂志 2012(05)
- [5].硫氧还蛋白相互作用蛋白在结肠癌中表达的变化及其调节结肠癌细胞增殖机制研究[J]. 实用中西医结合临床 2020(12)
- [6].糖尿病肾病与硫氧还蛋白及其相互作用蛋白关系的研究进展[J]. 中国老年学杂志 2013(07)
- [7].胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制[J]. 世界华人消化杂志 2011(35)
- [8].硫氧还蛋白和硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病肾病关系的研究进展[J]. 中国老年学杂志 2011(11)
- [9].肺癌晚期姑息治疗患者病原菌感染分布及X蛋白相互作用蛋白和穴样内陷蛋白1表达的研究[J]. 中华医院感染学杂志 2016(13)
- [10].硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与消化系疾病的关系[J]. 世界华人消化杂志 2011(18)
- [11].硫氧还蛋白和硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病及其并发症关系的研究进展[J]. 国外医学(老年医学分册) 2008(06)
- [12].基质金属蛋白酶诱导因子及其相互作用蛋白在动脉粥样硬化中的作用[J]. 心血管病学进展 2012(02)
- [13].基质相互作用蛋白分子1在肿瘤发生发展和临床应用中的研究进展[J]. 天津医药 2018(06)
- [14].新诊断2型糖尿病患者血清硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与颈动脉粥样硬化的相关性[J]. 中国现代医学杂志 2016(18)
- [15].肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白的筛选及验证[J]. 解放军医学院学报 2018(05)
- [16].siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移[J]. 南方医科大学学报 2016(06)
- [17].ubiquilin 4相互作用蛋白的鉴定[J]. 癌症进展 2018(05)
- [18].糖尿病肾病早期大鼠肾脏中硫氧还蛋白相互作用蛋白的表达研究[J]. 中国糖尿病杂志 2011(03)
- [19].硫氧还蛋白相互作用蛋白介导胰岛β细胞凋亡及功能障碍研究进展[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2015(03)
- [20].硫氧还蛋白相互作用蛋白与2型糖尿病及胰岛素抵抗的相关性[J]. 江苏医药 2011(21)
- [21].硫氧还蛋白相互作用蛋白与多囊卵巢综合征代谢紊乱的研究进展[J]. 医学综述 2016(20)
- [22].组蛋白去乙酰化酶1相互作用蛋白的筛选[J]. 现代肿瘤医学 2017(04)
- [23].Abl相互作用蛋白-1在肿瘤基础与临床研究中的进展[J]. 中国现代医学杂志 2011(17)
- [24].2型糖尿病患者检测血清硫氧还蛋白相互作用蛋白与唾液酸的临床价值[J]. 北华大学学报(自然科学版) 2019(04)
- [25].免疫共沉淀筛选牛卵泡CART相互作用蛋白的研究[J]. 畜牧兽医学报 2015(12)
- [26].FAM3A相互作用蛋白的检测[J]. 中山大学学报(医学科学版) 2008(05)
- [27].表达克隆技术在蛋白质相互作用研究中的应用[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2012(08)
- [28].果蝇NOMPC相互作用蛋白的筛选与鉴定[J]. 复旦学报(自然科学版) 2017(04)
- [29].PHF7在人精子中相互作用蛋白分析[J]. 中国男科学杂志 2020(02)
- [30].家蚕热休克蛋白HSP60相互作用蛋白筛选与鉴定[J]. 中国农业科学 2019(02)