人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的体外研究

论文摘要

目的:探讨人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的体外作用。 方法:通过血清药理学的相关方法,制备人参胡核汤高、中、低剂量、番茄红素及空白组的血清。各组与PC-3细胞作用48小时、72小时后,光镜观察细胞形态学改变;MTT法观察细胞增殖的抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布、凋亡率变化;免疫细胞化学法检测bcl-2、bax表达;RT-PCR技术检测前列腺特异性抗原（PSA）表达。 结果:人参胡核汤含药血清各组作用48小时、72小时后,表现出不同程度的细胞皱缩,边缘毛糙,细胞核固缩或碎裂,细胞体积缩小;各组均可抑制PC-3细胞增殖,阻滞G1期向S期的转化;促进细胞不同程度的凋亡;对PC-3细胞bcl-2、bax表达的影响不明显;降低PSA表达水平。上述指标中,以人参胡核汤高剂量组作用48小时的效果最为明显。 结论:人参胡核汤含药血清可使PC-3细胞的形态发生改变、抑制PC-3细胞增殖、阻滞G1期向S期的转化、促进PC-3细胞凋亡、降低PSA的表达。

论文目录

• 目录
• 前言
• 实验研究
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 培养液及试剂配制
• 2.1.1 RPMI-1640培养液
• 2.1.2 胎牛血清的灭活
• 2.1.3 D-Hank's平衡液
• 2.1.4 0.125％胰蛋白酶
• 2.1.5 PBS缓冲液
• 2.1.6 10％冰醋酸
• 3'>2.1.7 5.6％NaHCO₃
• 2.2 人前列腺癌PC-3细胞的培养
• 2.2.1 人前列腺癌PC-3细胞的培养及换液
• 2.2.2 人前列腺癌PC-3细胞的传代培养
• 2.3 人参胡核汤含药血清的制备
• 2.3.1 动物分组
• 2.3.2 药物制备
• 2.3.3 给药剂量
• 2.3.4 给药方法及时间
• 2.3.5 人参胡核汤含药血清的制备
• 2.4 观测指标及检测方法
• 2.4.1 PC-3细胞形态学观察
• 2.4.1.1 标本制备（细胞爬片、加药）
• 2.4.1.2 标本的染色步骤
• 2.4.1.3 形态学观察
• 2.4.2 人参胡核汤对PC-3细胞增殖的影响
• 2.4.2.1 铺板
• 2.4.2.2 分组与加样
• 2.4.2.3 四甲基偶氮唑盐（MTT）的配制
• 2.4.2.4 细胞增殖抑制率的检测
• 2.4.3 细胞周期及凋亡的检测
• 2.4.3.1 样本的制备
• 2.4.3.2 流式细胞分析
• 2.4.4 bcl-2、bax的检测
• 2.4.4.1 标本制备
• 2.4.4.2 bcl-2、bax的染色步骤
• 2.4.4.3 阳性细胞数的观察
• 2.4.5 前列腺特异性抗原（PSA）的检测
• 2.4.5.1 标本的制备
• 2.4.5.2 RT-PCR的操作
• 2.5 统计学处理
• 3.结果与分析
• 3.1 形态学变化
• 3.2 人参胡核汤对PC-3细胞的生长抑制作用
• 3.3 对细胞周期及凋亡的影响
• 3.4 对bcl-2、bax表达的影响
• 3.5 对前列腺特异性抗原（PSA）表达的影响
• 讨论
• 1.中医对前列腺癌的认识
• 1.1 病名的认识
• 1.2 病因的认识
• 1.3 病机的认识
• 2.现代医学对前列腺癌的认识
• 3.选择PC-3细胞的依据
• 4.实验方法的选择依据
• 4.1 选择血清药理学方法的依据
• 4.2 选择MTT法的的依据
• 4.3 选择流式细胞术的依据
• 4.4 选择免疫细胞化学的依据
• 4.5 选择RT-PCR技术的依据：
• 5.对照组药物番茄红素的选择依据
• 6.人参胡核汤的组方依据
• 7.人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞体外作用的探讨
• 7.1 对细胞形态学的影响
• 7.2 细胞的生长抑制作用
• 7.3 阻滞G1期向S期转化
• 7.4 诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡
• 7.5 对bcl-2与bax表达的影响：
• 7.6 抑制人前列腺特异性抗原（PSA）的表达：
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献：
• 附件一：综述 前列腺癌的中医药研究进展
• 附件二：附图
• 附件三：攻读硕士学位期间发表的论文
• 附件四：声明