桑籽发芽过程中1-脱氧野尻霉素的变化及乳汁抗蚜虫研究

论文摘要

桑树乳汁是一种由桑树乳汁管分泌的特殊物质。它含有蛋白质、糖、脂肪、生物碱等。桑树中的1-脱氧野尻霉素（DNJ）是一种能高效抑制α–葡萄糖苷酶活性、治疗糖尿病的天然产物。它主要存在于桑叶、桑枝和桑根中，在桑树种子中也有一定量的DNJ，具有重要的研究价值。多数研究主要针对桑树的根、茎、叶等器官中的DNJ的提取与测定，但对桑树生长发育过程中DNJ含量的变化规律研究较少。本论文以桑籽作为实验材料，对桑籽到幼苗发育过程中DNJ的变化及桑树乳汁抗蚜虫的特性进行了研究分析，为桑树乳汁的形成规律以及以桑树为材料的生物抗虫研究打下基础。DNJ含量测定是采用柱前衍生化反相高效液相色谱-紫外检测法（RP-HPLC-UV）。桑籽催芽处理，在28～32℃的光照培养箱中培育，待长出两片子叶时开始分离根、茎、叶，置常温下使其干燥。以65％的乙醇为溶剂提取桑苗、桑树干种子、浸泡后的种子和刚发芽的种子中的DNJ，9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC-Cl）为衍生剂，在pH=8.5的硼酸钾缓冲液中在20℃下进行衍生化反应20min，生成具有紫外吸收的衍生物DNJ-FMOC。以乙腈-0.1％醋酸（55：45，V/V）为流动相，流速为1.0mL／min，柱温为25℃，荧光检测器激发波长为254nm的RP-HPLC-UV法测定DNJ-FMOC含量。实验结果显示：衍生物DNJ-FMOC的色谱峰分离效果好，DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈线性关系。RP-HPLC-UV法测定桑苗中DNJ含量可以作为桑树组织和相关药物中DNJ含量测定的有效方法。用RP-HPLC-UV法测定以65％的乙醇为溶剂提取的桑苗根、茎、叶、桑树干种子、浸泡后的种子和刚发芽的种子中DNJ的含量，结果发现桑树中DNJ含量有很大差异，种子中DNJ含量较高，随着种子的发育直至发芽后，DNJ含量逐渐减少，之后增加并趋于稳定。用RP-HPLC-UV法测定分别以65％的乙醇和0.05mol/L HCl为溶剂提取桑苗叶片和茎中的DNJ，结果发现用65%乙醇提取的叶片和茎中的DNJ含量均高于用0.05mol/L HCl提取的叶片和茎中DNJ含量。用徒手切片和石蜡切片法观察桑树的结构及乳汁管的分布情况，结果表明，桑树中的乳汁管是无节乳汁管，在桑树的根、茎、叶中均存在乳汁管，主要分布在皮层和韧皮部，且在各器官的分布数量有差异。采用内吸法、浸叶法、浸虫法来测定不同浓度的桑树乳汁对蚜虫的抗性作用。发现当乳汁浓度为20%时蚜虫的死亡率为最高。结果表明：桑树乳汁对蚜虫有较强的触杀作用，处理时间越长，蚜虫的死亡率越明显；桑乳汁浓度越高对蚜虫影响越大。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 1 文献综述
• 1.1 桑树概况及其成分
• 1.1.1 桑树的概况
• 1.1.2 桑树的主要化学成分
• 1.2 桑树乳汁
• 1.2.1 桑树乳汁的特性
• 1.2.2 桑树乳汁的主要成分
• 1.2.3 桑树乳汁管的形态特征
• 1.2.4 乳汁管的发育
• 1.3 1-脱氧野尻霉素（DNJ）
• 1.3.1 DNJ 的提取与检测
• 1.3.2 徒手切片和石蜡切片
• 1.4 桑树抗蚜虫性研究
• 1.4.1 桑树害虫
• 1.4.2 蚜虫简介
• 1.4.3 桑树抗虫性
• 1.4.4 植物源杀虫剂的概况
• 1.4.5 桑树虫害的生物防治
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验试剂
• 3.1.3 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 DNJ的提取纯化
• 3.2.2 DNJ衍生化
• 3.2.3 空白溶液的制备
• 3.2.4 DNJ标准液的配制
• 3.2.5 DNJ含量测定方法
• 3.2.6 测定重复次数
• 3.2.7 数据处理
• 3.2.8 DNJ标准曲线的制作
• 3.2.9 桑树根、茎、叶的石蜡切片和茎的徒手切片
• 3.2.10 桑叶浸提液对几种蚜虫的毒力测定方法
• 4 结果与分析
• 4.1 桑树幼苗和种子中 DNJ 的含量分析
• 4.1.1 DNJ色谱峰的确定
• 4.1.2 标准工作曲线的绘制
• 4.1.3 桑树幼苗中不同部位和种子中 DNJ 含量比较
• 4.1.4 不同提取剂提取幼苗中 DNJ 含量比较
• 4.2 桑树组织的切片观察
• 4.2.1 桑树根、茎、叶石蜡切片观察
• 4.2.2 桑树茎徒手切片观察
• 4.3 桑树乳汁对蚜虫的影响
• 4.3.1 内吸法测定桑树乳汁对蚜虫的影响
• 4.3.2 浸叶法测定桑树乳汁对蚜虫的影响
• 4.3.3 浸虫法测定桑树叶片浸提液对蚜虫的影响
• 5 结论
• 6 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的学术论文