论文摘要
目的:利用一种精细分离填料MCI GEL CHP20P对孕马尿中获取的结合雌激素提取物进行分离纯化,在提高总结合雌激素纯度的同时,保留FDA规定的所有特征共有峰。方法:（1）考察3种MCI GEL的静态吸附量,筛选MCI GEL系列精细分离填料。（2）考察MCI GEL CHP20P对结合雌激素提取物的动态饱和吸附量。（3）考察纯化工艺中洗脱溶剂的浓度。（4）根据动态饱和吸附量和洗脱溶剂浓度结果,以结合雌激素的纯度和收率为指标,通过单因素试验,正交试验确定MCI GEL CHP20P分离纯化结合雌激素提取物的吸附和洗脱条件。（5）纯化工艺确定后,进行最佳工艺的重复验证试验及MCI GEL CHP20P稳定性试验。（6）对纯化工艺重复验证试验所得的8批结合雌激素精制物进行HPLC指纹图谱的分析,并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件2004版》对指纹图谱进行相似度评价,同时分析结合雌激素精制物中FDA规定的21个共有峰的保留情况。（7）对纯化工艺重复验证试验所得的8批结合雌激素精制物进行GC指纹图谱的分析,并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件2004版》对指纹图谱进行相似度评价,同时分析结合雌激素精制物中FDA规定的20个共有峰的保留情况。结果:（1）MCI GEL CHP20P对结合雌激素提取物的静态吸附量最大,为104.9mg·mL-1（干体积）,选择该分离填料用于结合雌激素提取物的纯化精制。（2）MCI GEL CHP20P对结合雌激素提取物的动态饱和吸附量为90mg·mL-1（湿体积）。（3）FDA规定的除十种结合雌激素外的其它有效成分的最佳沈脱溶剂为水溶液,十种结合雌激素的最佳洗脱溶剂为10%甲醇水溶液。纯化工艺确定最佳洗脱溶剂为水及10%甲醇溶液。（4）MCI GEL CHP20P分离纯化结合雌激素提取物的最佳吸附和洗脱条件为:径高比为1/8;上样量为45mg·mL-1湿树脂体积;上样液浓度为0.16g·mL-1;洗脱溶剂用量/CE精制物量为45mL·g-1水以及450mL·g-1的10%甲醇水溶液;洗脱溶剂不需调节pH值。（5）最佳纯化工艺条件下,MCI GELCHP20P对结合雌激素提取物吸附及解吸附稳定,且可以重复使用8-9次后经过再生;十种结合雌激素的纯度明显提高,收率均在90%以上;另外,结合雌激素提取物经过纯化精制后,所得的结合雌激素精制物异味去除且色泽变淡。（6）8次重复验证试验所得的结合雌激素精制物HPLC指纹图谱之间的数学相似度较高;且21个特征峰参数与FDA提供参数一致或接近。（7）8次重复验证试验所得的结合雌激素精制物GC指纹图谱之间的数学相似度较高;且20个特征峰参数与FDA提供参数一致或接近。结论:MCI GEL CHP20P对结合雌激素提取物具有良好的静态及动态吸附性能,流出液达到12倍柱体积时才开始出现泄漏,并较长时间保持低浓度泄漏,当流出液体积达到15倍柱体积时达到吸附平衡,此时MCI GEL CHP20P对结合雌激素提取物的动态饱和吸附量约为90mg·mL-1（湿体积）。MCI GEL CHP20P对结合雌激素吸附及解吸附性能良好,确定的吸附与解吸附条件简单易行,纯化工艺稳定,可靠,所得的结合雌激素精制物纯度高,色泽淡,无异味。通过HPLC以及GC指纹图谱分析,纯化精制工艺所得的结合雌激素精制物保留了FDA规定的所有特征共有峰,其含有FDA规定的活性成分。此纯化工艺为今后的结合雌激素工业化生产的改进与发展提供了坚实的基础。