论文摘要
目的:研究地高辛（Dig）人工抗原的合成及鉴定方法;筛选制备杂交瘤细胞的最适条件;研究Dig单克隆抗体的制备方法。方法:采用高碘酸钠氧化法将半抗原Dig分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）反应偶联,制得Dig-BSA人工抗原和Dig-OVA包被抗原后,通过紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）和基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定该人工抗原并测定其中结合的半抗原数目;通过酶联免疫吸附试验（ELISA）进行抗原特异性鉴定;以此抗原免疫七周龄雌性BALB/C小鼠,制备抗血清,以Dig-OVA作包被抗原,通过ELISA检测血清抗体效价。以SP2/0骨髓瘤细胞和经Dig-BSA免疫的高效价BALB/C小鼠脾细胞为材料,聚乙二醇（PEG,MW=4000）为诱导剂,进行细胞融合,研究不同的饲养细胞密度、PEG浓度、PEG剂量、SP2/0与脾细胞比例、混合细胞密度等因素对细胞融合率的影响。将混合细胞接种于96孔细胞培养板中,HAT培养液对混合细胞进行选择性培养,采用间接ELISA方法和有限稀释法对杂交瘤细胞进行筛选、鉴定和重克隆。结果:人工抗原的紫外扫描图谱和红外光谱图证实Dig-BSA轭合物偶联成功;MALDI-TOF-MS谱结果表明合成的人工抗原Dig-BSA中Dig与BSA的结合比约为5:1;免疫小鼠得到特异针对Dig的抗血清,Dig抗体的效价达到了1∶62500。细胞融合采用45%PEG（含5%DMSO）作为诱导剂,SP2/0与脾细胞比例为1︰5,96孔板内混合细胞密度高达105/孔,无需添加饲养细胞,融合效果较好,细胞融合率高达84.7%。所筛选的杂交瘤细胞经间接ELISA鉴定能够稳定分泌Dig单克隆抗体。结论:该实验方法成功地合成了地高辛人工抗原（Dig-BSA）;且该人工抗原免疫原性良好,能够有效刺激BALB/C小鼠机体产生免疫应答反应并产生相应的Dig抗体。本实验筛选出了细胞融合的最适条件,提高了Dig单克隆抗体的制备效率。实验所采用的淋巴细胞杂交瘤技术能够成功制备Dig单克隆抗体。