鞘内注射PSD-93 AS ODN对CCI大鼠吗啡耐受的影响

论文摘要

背景：神经源性疼痛是由中枢或外周神经系统损伤或疾病引起的疼痛综合征。外周神经损伤引起的神经源性疼痛，表现为痛觉过敏、痛觉超敏和自发性疼痛等，目前发病机制尚不清楚，缺乏有效的治疗措施。吗啡作为一种强效麻醉性镇痛药，对许多急慢性疼痛均具有较强的镇痛作用，但它的成瘾性和耐受性大大限制了其使用范围。吗啡耐受的机制非常复杂，涉及多种神经递质系统和信号转导系统。近年来，有人提出N-甲基-D-门冬氨酸受体（NMDA受体）参与吗啡耐受的形成。PSD-93蛋白属于膜结合鸟苷酸激酶（MAGUK）蛋白家族的一种，PSD-93蛋白的PDZ2区可与NMDA受体的NMDAR2亚基羧基端结合，影响其下游的信号传导（如神经细胞的一氧化氮合酶，nNOS）。PSD-93反义寡聚脱氧核苷酸（PSD-93 AS DON）是一串脱氧核苷酸序列，可在基因水平下调PSD-93蛋白在中枢神经系统突触后膜的含量。目的：观察鞘内注射PSD-93 AS ODN对大鼠坐骨神经慢性结扎损伤（CCI）模型大鼠的镇痛效应及对吗啡镇痛耐受的影响，并探讨其作用机制。方法：选取体重为200-250g的健康Sprague-Dawley（SD）大鼠（雌雄不拘），用改良的Yaksh法进行大鼠腰段鞘内置管。取鞘内置管成功的SD大鼠（雌雄不拘）36只，随机分为6组（n=6）：F组，NS组，MS组，AS组，MA组，Mor组。F组大鼠左下肢中段坐骨神经仅于空气中暴露5min后，还复至原位；其余5组大鼠取左下肢中段坐骨神经做CCI模型。F组、NS组予生理盐水（20ul，2次／日，给药时间：8am，6pm）。MA组于上午8am：鞘内予吗啡（20ug／5ul）+PSD-93 AS DON（5ug／10ul），以5ul生理盐水冲管；下午6pm：鞘内予吗啡（20ug／5ul），以15ul生理盐水冲管。Mor组鞘内予吗啡（20ug／5ul，2次／日，给药时间：8am，6pm），每次注药后以15ul生理盐水冲管。AS组于上午8am：鞘内予PSD-93 AS DON（5ug／10ul），注药后以10ul生理盐水冲管；下午6pm：鞘内予生理盐水20ul。MS组于上午8am：鞘内予PSD-93 MS PSD（5ug／10ul），注药后以10ul生理盐水冲管；下午6pm：鞘内予生理盐水20ul。各组于CCI术后第4d（手术组大鼠出现热、机械痛敏反应后）开始鞘内给药，注药部位为大鼠腰段，连续6d。于CCI术前1d，术后1d，3d，4d，5d，6d，7d，9d选择第二次注药后0.5小时观察大鼠热敏，机械痛敏。于第9d观察完毕后处死，取大鼠腰4-腰6段脊髓行免疫组化观察。结果：1．行为学方面各组间术前基础机械痛、热痛阈值差异无显著意义，F组术侧在实验的9d内机械痛、热痛阈值波动于初始水平，各实验点差异无显著意义（P＞0.05）。AS组、MOR组、MA组、MS组、NS组大鼠CCI术后第1-3d，机械痛、热痛阈值无明显差异；术后4-9d，除F组外其余各组大鼠术侧机械痛、热痛阈值下降，以MS组、NS组为下降最为显著，与AS组、MOR组、MA组相比差异有显著意义（P＜0.01）；术后第7d，MOR组机械痛、热痛阈值下降明显，与MA组相比差异有显著意义（P＜0.01），而AS组于术后第6天机械痛、热痛阈值明显下降，与MA组相比差异有显著意义（P＜0.01）。2．免疫组化观察本实验选取nNOS阳性细胞作为观察疼痛程度的免疫组化指标，疼痛程度越高，nNOS阳性细胞越多，灰度值也越高。NS组、MS组、AS组术侧所标的nNOS阳性细胞明显多于F组（P＜0.05）。在MA组的术侧背角浅层，nNOS阳性细胞表达较MOR组、AS组明显减少（P＜0.01）。Mor组的NMDAR1受体表达量比F组、NS组、MS组、AS组明显增加（P＜0.01）；MA组的NMDAR1受体数量也有所增加，但与Mor组相比明显减少（P＜0.01）。结论：1．鞘内注射5ug PSD93 AS ODN对CCI大鼠具有轻度镇痛作用，但镇痛作用不超过3天。2．大鼠脊髓背角NMDA R1受体和nNOS与慢性吗啡耐受形成的中枢机制有关。3．5ug PSD-93 AS ODN对预防CCI大鼠慢性吗啡耐受有一定作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文部分
• 第一章前言
• 第二章 鞘内注射 PSD-93 AS ODN 对 CCI 大鼠吗啡耐受的行为学影响
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 第三章 鞘内分别及联合注射 PSD-93 AS ODN、吗啡对 CCI 大鼠脊髓背角 nNOS 及 NMDAR 含量的影响
• 3.1 材料和仪器
• 3.2 结果
• 第四章 讨论
• 4.1 大鼠CCI模型的建立
• 4.2 NMDA受体、nNOS与吗啡耐受
• 4.3 痛觉过敏与nNOS、NMDA受体
• 4.4 PSD-93与吗啡耐受
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果