睾酮在炎症状态下对人脐静脉内皮细胞组织因子途径抑制物表达的调节及机制

论文摘要

背景急性冠脉综合征（ACS）是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的危重症,尽管其发病存在明显的性别差异,但雄激素在冠心病中的作用一直存在争议,是目前心血管领域的研究热点之一;研究证实血管内皮抗凝活性降低、血栓形成是急性冠脉综合征的主要特征。我们前期实验发现生理浓度睾酮（Testosterone, T）可促进人脐静脉内皮细胞（HUVEC）重要抗凝物质组织因子途径抑制物（TFPI）的表达,并且可以调节包括核因子-kappaB（NF-κB）在内的多个转录因子的活性。NF-κB是炎症过程的重要介质,其活化所诱导的炎症因子表达在动脉粥样硬化的发生发展中发挥着重要作用。研究发现致炎因子诸如肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）可以调节包括凝血启动因子——组织因子（TF）在内的多个血栓因子活性,且对部分因子的调节是通过活化NF-κB途径实现,由此可见睾酮及TNF-α对NF-κB活性均有调节作用,然而睾酮是否可以干预TNF-α诱导的炎症状态下抗凝因子TFPI的表达从而促进内皮细胞炎症状态下的抗凝活性,并且其调节是否通过核转录因子NF-κB通路实现目前尚未见报道,本实验即对上述问题进行探讨。目的通过体外培养人脐静脉内皮细胞,观察生理浓度睾酮、TNF-α处理后TFPI表达及NF-κB活性的变化,探讨生理浓度睾酮对TNF-α介导的炎症状态下内皮细胞TFPI表达的调节作用及其机制。方法（1）将体外培养的3-4代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为空白组（无细胞组）、单纯培养基对照组、生理浓度睾酮（30nmol/L）组、TNF-α（10ng/mL）组、TNF-α（20ng/mL）组以及后两者分别与睾酮共同作用组,培养48h后用MTT方法检测细胞活性;（2）HUVEC 3-4代分为单纯培养基对照组、生理浓度睾酮（30nmol/L）组、TNF-α（20ng/mL）组以及两者共同作用组,培养48h后ELISA法测各组上清液中总TFPI蛋白含量,real-time RT-PCR检测各组TFPI mRNA表达;（3）生理浓度睾酮（30nmol/L）、TNF-α（20ng/mL）分别干预以及共同作用于HUVEC 12h后,应用电泳迁移率变动分析（EMSA）技术,检测NF-κB活性变化。结果（1）睾酮及各浓度TNF-α分别作用或共同干预48小时对脐静脉内皮细胞活性没有明显影响;（2）TNF-α（20ng/mL）可显著下调TFPI mRNA和蛋白的水平（P<0.001）,而生理浓度睾酮（30nmol/L）可减轻TNF-α对TFPI表达的抑制作用（P<0.05）;（3）TNF-α（20ng/mL）可以明显激活NF-κB（P<0.05）,而生理浓度睾酮（30nmol/L）不但可以单独抑制NF-κB活性而且可以减弱TNF-α对NF-κB的活化作用（P<0.05）。结论在人脐静脉内皮细胞,致炎因子TNF-α可以抑制TFPI的表达;而生理浓度睾酮可减弱TNF-α对TFPI表达的抑制,从而发挥了其在炎症状态下防止血栓形成的作用;而该作用机制可能是通过抑制NF-κB活化实现。

论文目录

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• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 硕士生学习期间发表论文及学术活动
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