论文摘要
植物体细胞胚发生是植物体细胞在离体培养条件下的基本发育途径之一。本研究以枸杞为实验材料，首先通过不同部位的外植体和不同激素浓度的使用，建立了枸杞体细胞胚诱导的高效体系。在此基础上，运用蛋白质组学的核心技术从蛋白质水平上对枸杞体细胞胚发生特异基因的表达鉴定进行了研究。对枸杞非胚性愈伤组织（embryonic callus，EC）和体细胞胚（somatic embryo，SE）提取蛋白质进行双向电泳，并对直接提取法、沉淀法和TCA-丙酮沉淀法进行了比较和适当改进，对不同电泳聚焦参数对电泳效果的影响进行了探讨。电泳图像经处理后，用Quantity one等软件定量分析凝胶图谱找到差异表达蛋白点并对体细胞胚中的差异蛋白点进行了质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定和数据库检索。其结果如下：1．枸杞无菌苗下胚轴培养在含2，4-D 0.4mg／L的MS诱导培养基上时，得到的胚性愈伤组织质量最好，转入无激素MS培养基时得到的体细胞胚最多。2．通过对不同蛋白提取方法的比较，发现TCA-丙酮沉淀法得到的蛋白量较多，电泳效果较好，为蛋白双向电泳体系的建立奠定了基础。3．通过蛋白质SDS-PAGE电泳显示，枸杞非胚性愈伤组织与体细胞胚在蛋白质表达上存在明显差异，并对差异条带作了蛋白条带数量、位置、光密度值分析。4．对枸杞非胚性愈伤组织和体细胞胚的蛋白进行双向电泳分别得到244和256个蛋白点，图谱经2-DE软件分析找到了体细胞胚发生中的特异蛋白点，并对其中两个明显和重复性好的蛋白点进行了质谱分析和数据库检索，其中一个得到了部分氨基酸序列。5．通过生物信息学检索方法，对差异蛋白质的来源、性质及其对应的可能基因组序列进行了检索和初步研究。通过以上各种研究方法的应用，我们建立了枸杞体细胞胚的高效诱导体系；并通过蛋白组学的各种方法对枸杞体细胞胚诱导早期相关蛋白表达进行了初步分析，得到了体细胞胚诱导的特异蛋白点及其氨基酸序列，在蛋白水平对体细胞胚的发生作出了解释，并为进一步研究体细胞胚发生的早期相关基因信息奠定了良好的基础。本实验为在蛋白水平上阐明枸杞体细胞胚发生的分子机制掀开了崭新的一页，并可从氨基酸序列预测基因序列，为基因克隆奠定基础。
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缩略词表中文摘要英文摘要第一章 前言一 体细胞胚研究进展1 体细胞胚的发生途径2 体细胞胚发生过程中的生理生化变化3 内源激素含量对体细胞胚的影响4 植物生长调节剂对体细胞胚的作用5 体细胞胚相关基因和特异蛋白的表达研究二 植物蛋白质组学研究进展1 蛋白质组学的概念2 蛋白质组学的主要研究方法2.1 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像分析2.1.1 双向电泳2.1.2 图像分析技术2.2 蛋白质组鉴定技术2.2.1 基于MALDI的技术2.2.2 基于ESI的技术2.2.3 蛋白质微测序2.2.4 氨基酸组成分析2.3 蛋白质组数据库2.4 同位素译码的亲和标签技术三 枸杞及其体细胞胚研究进展1 药用研究2 原生质体研究3 实验现状4 本研究的目的与意义第二章 枸杞体细胞胚高频诱导和再生体系的建立一 材料与方法1.1 植物实验材料1.2 无菌苗的培养1.2.1 灭菌1.2.2 培养基组成1.3 组织培养1.3.1 外植体的选择1.3.2 培养条件1.3.3 愈伤组织的诱导1.4 体细胞胚诱导二 结果与分析2.1 外植体的选择2.2 激素配方的优化2.3 其他条件的优化三 讨论第三章 枸杞体细胞胚双向电泳技术的建立一 实验试剂和仪器1.1 生化试剂1.2 主要仪器设备二 蛋白质提取方法的选择2.1 直接提取法2.2 沉淀法2.3 TCA-丙酮沉淀法三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳3.1 制胶和电泳3.2 凝胶染色3.3 凝胶图像获取3.4 图像分析四 双向电泳4.1 第一向固相化pH梯度等电聚焦电泳4.2 平衡4.3 第二向SDS-PAGE垂直板电泳4.4 凝胶染色4.5 凝胶图像获取4.6 图像分析五 结果与分析5.1 不同蛋白质提取方法效果比较5.1.1 蛋白质提取方法的比较5.1.2 不同材料蛋白质条带差异5.2 双向电泳体系优化和差异分析5.2.1 不同等电聚焦参数对等电聚焦电泳的影响5.2.2 双向电泳图谱分析三 讨论第三章 蛋白质差异条带的质谱分析一 材料与方法二 结果三 讨论四 结论图版说明图版参考文献致谢
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标签：枸杞论文; 体细胞胚论文; 胚性愈伤组织论文; 蛋白质组学论文; 双向电泳论文; 生物信息学论文;
枸杞体细胞胚双向电泳技术的建立与蛋白质表达谱的初步分析
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