Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及表达

Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及表达

论文摘要

利用PCR 的方法设计两条引物从肠出血性大肠杆菌O157:H7 的基因组DNA 中扩增出编码Stx1A-LHRH 的重组融合基因片段,定向克隆到表达质粒pET28a 中,构建重组表达质粒pET28a::Stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解细菌对表达蛋白进行初步定位。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了23.7kDa 的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%,约占细菌超声波处理后沉淀的63.4%。不同诱导时间的结果表明,在3-7h 的诱导时间内,目的蛋白的表达量没有明显变化。利用PCR的方法设计两条引物扩增出融合基因Stx1A-LHRH,定向克隆到质粒pMAL-p2x 中。将重组质粒pMAL-p2x:: Stx1A-LHRH 转化到宿主菌TB1 中,对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解处理细菌。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了66kDa 的目的融合蛋白MBP-Stx1A-LHRH,且大部分呈可溶性表达。对表达出的可溶性蛋白进行亲和层析纯化,纯化后的蛋白用factorⅩa 酶切后获得融合蛋白Stx1A-LHRH。

论文目录

  • 英文缩略词
  • 引言
  • 实验一 Stx1A-LHRH 融合毒素基因的构建及表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 实验二 Stx1A-LHRH 重组融合蛋白的可溶性表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 附图
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师及作者简介
  • 相关论文文献

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