论文摘要
研究背景21三体综合征又名唐氏综合征（Down syndrome,DS）,是最常见的染色体病。目前该病尚无有效的治疗方法,21三体患儿给社会和家庭带来沉重的负担。由于其确切病因及发病机制尚不明确,故做不到孕前干预,只能通过产前诊断及治疗性流产以达到预防21三体患儿的出生。已出生21三体患儿的诊断主要是依靠外周血染色体核型分析技术,但是该技术存在周期长、操作烦琐等缺点。目前21三体综合征产前诊断主要通过绒毛膜取样、羊膜腔穿刺、脐带穿刺获取胎儿细胞进行染色体核型分析。但是这些技术存在成本高、细胞培养易失败及严格的时间要求等缺点。近年发展起来的荧光原位杂交技术（FISH）,具备快速的优势,对羊膜腔穿刺术是一个很好的补充,但因费用昂贵一般孕妇难以接受。以上方法虽然能诊断染色体非整倍体,却对异常染色体的亲源性不能判断,而且不能检测出由于21号染色体微小片段的重复引起的唐氏综合征。随着分子遗传学技术的发展,多种分子遗传学方法用于21三体的诊断。1995年,Fuentes等将21三体综合征的染色体的关键区域（DSCR）定位于21q22.1-q22.2。选取21号染色体上关键区域上的高度多态性的短串联重复序列（short tandem repeat,STR）位点,利用聚合酶链反应（poly-merase chainreaction,PCR）技术扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色技术,可以诊断21三体。该方法与传统染色体分析相比优点为省时、操作简便、费用低等,而且STR-PCR技术可以检测到关键区域微小片段的重复引起的21三体综合征,辅助染色体分析,可以提高唐氏综合征的检出率。研究目的探讨STR-PCR技术在唐氏综合征诊断中的应用价值,建立快速高效诊断唐氏综合征的分子遗传学方法,辅助外周血及羊水细胞染色体核型分析。材料与方法1.研究对象包括60例染色体核型分析结果为21三体患儿的外周血及其父母外周血和50例羊水标本及部分胎儿父母外周血。2.研究方法选取21号染色体关键区域及其附近的8个STR位点,引物序列来自GenBank。用Chelex法提取标本DNA,利用聚合酶链反应技术扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,硝酸银染色技术,通过观察电泳条带,诊断21三体。实验结果1.60例21三体患儿58例被检出,检出率为96.7%。2.外周血标本中49例患儿额外的一条21号染色体来自母亲,5例来自父亲,4例不能判断亲源性。3.50例羊水标本检出10例21三体患儿,9例与羊水细胞染色体分析结果一致,1例羊水细胞染色体核型分析结果为“46,XY”。8例多余的21号染色体及1例部分21号染色体片段均来自母亲,1例额外的染色体来自父亲。4.综合外周血及羊水结果8个STR位点D21S1409、D21S1433、D21S11、D21S1444、D21S1437、D21S1414、D21S1442、D21S1809的杂合度为:0.69、0.84、0.88、0.81、0.75、0.79、0.82、0.68,对21三体的检出率为:30%、61%、67%、59%、43%、45%、58%、27%。联合使用8个位点对21三体的检出率为97%。结论1.本研究所选取的8个STR位点具有高度多态性,具有较高的杂合度,是较好的遗传标记。2.本研究联合应用8个STR位点,对21三体综合征的检出率达到97%,表明STR-PCR技术是一种快速、简便检测21三体综合征的方法,可以辅助染色体核型分析,对21三体综合征进行诊断。3.STR-PCR技术可以判断额外染色体起源,为进一步探讨21三体综合征的发不拼蛳禄 ?4.分子遗传学方法的发展为21三体综合征的诊断开辟了一条新的道路。