论文题目: 红车轴草异黄酮的分离、纯化、结构鉴定及生理功能研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 粮食,油脂及植物蛋白工程
作者: 陈寒青
导师: 金征宇
关键词: 红车轴草,异黄酮,三波长紫外分光光度法,分离鉴定,帕金森病,小胶质细胞,蛋鸡,生产性能,生理生化指标
文献来源: 江南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文以红车轴草为研究对象,主要研究内容包括:红车轴草全草及不同部位中蛋白质、氨基酸、异黄酮含量的测定;红车轴草异黄酮的种类;红车轴草异黄酮的定量方法;红车轴草异黄酮的提取工艺及树脂的筛选;红车轴草异黄酮单体的分离、纯化及结构鉴定;红车轴草异黄酮在帕金森病炎性细胞模型中的应用研究;红车轴草异黄酮不同添加形式及水平对产蛋后期蛋鸡生产性能及生理生化指标的影响。对红车轴草全草及不同部位(花、茎、叶)中蛋白质和氨基酸的含量进行了测定,结果表明,红车轴草中粗蛋白含量较高,全草中含量为16.66%,不同部位以叶中含量最高(21.57%),花次之(18.46%),茎中含量较低,只有8.87%。红车轴草全草中氨基酸总量为11.00%,不同部位中氨基酸总量差异较大,叶中含量最高,为17.73%,花次之,为13.71%,而茎中含量较低,只有6.44%。另外,叶中Asp、Glu、Leu、Val、Ala、Phe、Lys和Gly等8种氨基酸含量相对较高,分别为2.31%、2.18%、1.66%、1.25%、1.13%、1.10%、1.04%和1.03%。通过高效液相色谱法对红车轴草全草及不同部位(花、茎、叶)中四种异黄酮(biochanin A,formononetin,genistein,daidzein)的含量进行了测定,结果表明,以占干物质计,4种异黄酮总量,全草为0.531%,不同部位以叶中含量最高(0.856%),茎次之(0.403%),花中含量较低(0.258%)。鸡豆黄素A和芒柄花素是红车轴草中两种最主要的异黄酮,主要分布在叶中,其次是茎,花中含量较低。染料木素和大豆黄素,无论是花、茎还是叶,含量均较低。通过高效液相色谱法及紫外光谱技术,对红车轴草中异黄酮的种类进行了分析,结果表明,红车轴草中异黄酮约有20种左右。根据异黄酮的光谱特性,首次建立了红车轴草异黄酮的简易定量方法――三波长紫外分光光度法,该法测定红车轴草乙醇提取液中异黄酮含量时,能有效地消除色素和醇溶性蛋白等干扰物质对测定结果的影响。该方法具有简便、快速、准确等特点,适合于红车轴草异黄酮提取分离工艺探讨中多次快速检测异黄酮含量。通过单因素实验和正交实验,确定了红车轴草异黄酮的乙醇提取工艺参数:乙醇浓度80%,温度80℃,料液比1∶15,每次提取时间1h,提取3次,红车轴草异黄酮的提取率可达91.90%。通过对14种大孔吸附树脂静态吸附特性的研究,确定了AB-8树脂是一种理想的红车轴草异黄酮的吸附剂,该树脂对红车轴草异黄酮不仅吸附量大,而且解吸率高,适合红车轴草异黄酮的分离富集。通过对AB-8树脂的动态吸附特性研究,确定了红车轴草异黄酮提取液合适的上柱液浓度为0.79-1.11mg/mL,上柱液pH为4.24,上柱液流速为2BV/h。用4倍树脂柱床体积的80%乙醇以2BV/h流速进行洗脱,可基本上将异黄酮从树脂上解吸下来,并且洗脱峰集中、对称,无明显拖尾现象,异黄酮回收率为93.72%。
论文目录:
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 红车轴草植物学特性
1.1.1 红车轴草形态特征
1.1.2 红车轴草地理分布
1.1.3 红车轴草生物学与生态学特性
1.2 红车轴草的主要化学成分
1.3 红车轴草异黄酮的国内外研究现状
1.3.1 异黄酮类化合物在植物界的分布
1.3.2 红车轴草异黄酮的组成及结构
1.3.3 异黄酮的代谢、吸收与分布
1.3.4 异黄酮的主要生理功能
1.3.5 异黄酮在动物生产上的应用
1.3.6 异黄酮与帕金森病
1.3.7 异黄酮的定量方法
1.4 本课题的立题意义及主要研究内容
1.4.1 本课题的立题背景及意义
1.4.2 本课题的主要研究内容
参考文献
第二章 红车轴草组成成分的初步分析
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验材料与试剂
2.2.1.1 材料与试剂
2.2.1.2 仪器与设备
2.2.2 实验方法
2.2.2.1 原料的处理
2.2.2.2 红车轴草基本成分测定
2.2.2.3 红车轴草氨基酸含量的测定
2.2.2.4 红车轴草异黄酮含量的测定
2.2.2.5 红车轴草异黄酮种类的初步分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 红车轴草基本成分测定结果
2.3.2 红车轴草氨基酸含量测定结果
2.3.3 红车轴草异黄酮含量测定结果
2.3.4 红车轴草异黄酮种类的初步分析
2.4 本章小结
参考文献
第三章 三波长紫外分光光度法测定红车轴草异黄酮含量的研究
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料与设备
3.2.1.1 材料与试剂
3.2.1.2 仪器与设备
3.2.2 实验方法
3.2.2.1 原料的处理
3.2.2.2 红车轴草异黄酮的提取
3.2.2.3 三波长的选择
3.2.2.4 标准曲线的制作
3.2.2.5 精密度实验和加样回收率实验
3.2.2.6 单波长紫外分光光度法的建立
3.2.2.7 HPLC 法
3.3 结果与讨论
3.3.1 三波长的选择
3.3.2 标准曲线的制作
3.3.3 精密度实验和加样回收率实验
3.3.4 不同测定方法的比较
3.4 本章小结
参考文献
第四章 红车轴草异黄酮的提取工艺及树脂的筛选
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验材料与设备
4.2.1.1 材料与试剂
4.2.1.2 仪器与设备
4.2.2 实验方法
4.2.2.1 红车轴草异黄酮的定量方法
4.2.2.2 红车轴草异黄酮含量的测定
4.2.2.3 红车轴草异黄酮提取率的测定
4.2.2.4 单因素及正交实验设计
4.2.2.5 树脂的预处理
4.2.2.6 吸附树脂的物理性质
4.2.2.7 供试液的制备
4.2.2.8 大孔吸附树脂对红车轴草异黄酮的静态吸附实验
4.2.2.9 大孔吸附树脂的动态吸附实验
4.3 结果与讨论
4.3.1 红车轴草异黄酮提取工艺参数的确定
4.3.1.1 单因素实验
4.3.1.2 正交实验
4.3.2 大孔吸附树脂对红车轴草异黄酮吸附实验
4.3.2.1 大孔吸附树脂对红车轴草异黄酮的静态吸附
4.3.2.2 树脂吸附过程的动力学特征和平衡常数
4.3.2.3 树脂对红车轴草异黄酮的动态吸附实验
4.3.2.4 吸附透过曲线
4.3.2.5 解析曲线
4.3.2.6 AB-8 回收率和再生
4.3.2.7 AB-8 树脂富集纯化异黄酮
4.4 本章小结
参考文献
第五章 红车轴草异黄酮的分离、纯化及结构鉴定
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验材料与设备
5.2.1.1 材料与试剂
5.2.1.2 仪器与设备
5.2.2 实验方法
5.2.2.1 异黄酮的定性检验
5.2.2.2 红车轴草异黄酮的分离、纯化
5.2.2.3 红车轴草异黄酮单体的结构鉴定
5.3 结果与讨论
5.3.1 化合物A 的结构鉴定
5.3.2 化合物B 的结构鉴定
5.3.3 化合物C 的结构鉴定
5.3.4 化合物D 的结构鉴定
5.3.5 化合物E 的结构鉴定
5.3.6 化合物F 的结构鉴定
5.3.7 化合物G 的结构鉴定
5.3.8 化合物H 的结构鉴定
5.4 本章小结
参考文献
第六章 红车轴草异黄酮在帕金森病炎性细胞模型中的应用研究
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 实验材料
6.2.1.1 实验动物
6.2.1.2 实验试剂和药品
6.2.1.3 实验仪器
6.2.2 实验方法
6.2.2.1 异黄酮的前处理
6.2.2.2 中脑原代神经元-胶质细胞混合培养
6.2.2.3 小胶质细胞纯化培养
6.2.2.4 免疫细胞化学染色
6.2.2.5 [~3H]DA 摄取力的测定
6.2.2.6 TNF-α、NO、02—的测定
6.2.2.7 数据统计处理
6.3 结果与分析
6.3.1 原代培养物的鉴定
6.3.2 不同异黄酮对中脑混合培养体系DA 摄取力的影响
6.3.3 不同异黄酮对中脑混合培养体系DA 能神经元数目的影响
6.3.4 不同异黄酮对中脑混合培养体系小胶质细胞活化和炎性因子生成的影响
6.3.5 不同异黄酮对小胶质细胞纯化体系中小胶质细胞活化和炎性因子生成的影响
6.4 讨论
6.5 本章小结
参考文献
第七章 红车轴草异黄酮不同添加形式及水平对产蛋后期蛋鸡生产性能及生理生化指标的影响
7.1 引言
7.2 材料与方法
7.2.1 试验材料与设备
7.2.1.1 试验材料
7.2.1.2 仪器与设备
7.2.2 试验方法
7.2.2.1 试验设计
7.2.2.2 日常饲养管理
7.2.2.3 样品的采集与制备
7.2.2.4 测定指标及方法
7.2.2.5 数据统计处理
7.3 结果与分析
7.3.1 生产性能
7.3.2 生理生化指标
7.3.2.1 血清激素
7.3.2.2 血清抗氧化酶
7.3.2.3 肝脏抗氧化酶
7.3.2.4 血脂
7.3.2.5 血清碱性磷酸酶和钙磷
7.4 讨论
7.4.1 生产性能
7.4.2 激素
7.4.3 抗氧化酶
7.4.4 血脂
7.4.5 蛋壳品质
7.4.6 血清AKP
7.5 本章小结
参考文献
主要结论
论文创新点
附图
致谢
攻读博士学位期间发表(录用)的论文
发布时间: 2006-07-20
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