本文主要研究内容
作者孙莉（2019）在《中蜂囊状幼虫病毒SDLY株特性分析及其卵黄抗体研制》一文中研究指出：蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)是一种对蜜蜂致病性较强的病原体,具有明显的宿主特异性和地区差异性,其中感染中华蜜蜂的(Apis.cerana)SBV被称为中蜂囊状幼虫病毒(Chinese Sacbrood virus,CSBV)。一直以来CSBV严重威胁着中华蜜蜂养殖业的发展,一旦发生会对整个养蜂业造成毁灭性打击,但至今仍无有效的防治措施。本研究于2008年-2017年期间共分离得到31株CSBV,并以VP1基因为靶基因进行了核苷酸及其推导氨基酸同源性分析和遗传进化关系分析,明确了我国目前CSBV流行株具有几个分支,但新分离得到的毒株宿主特异性和区域差异性已经发生了改变。在此期间,本研究首次在山东临沂某意大利蜜蜂场从自然感染、并引起死亡的意大利蜜蜂(Apis.mellifera)幼虫样本中分离到一株CSBV(命名为:AmCSBV-SDLY,GenBank No.:MG733283.1),并通过临床观察、电镜检测、SDS-PAGE检测、琼脂凝胶免疫扩散试验检测和幼虫攻毒实验对CSBV进行了鉴定。在此基础上,对AmCSBV-SDLY基因组成及结构进行了分析,发现其基因组的核苷酸序列包括8794 bp(不包括poly A tail),碱基A、U、G和C的含量分别为29.95%、29.22%、24.30%和16.52%。核苷酸同源性达到86.8%-100%,由其推倒氨基酸的同源性达86.2%-100%。并以CSBV/SBV编码区全基因作为靶基因进行遗传进化分析,结果显示所有的SBVs/CSBVs分离株形成两个明显的分支,一个分支的SBVs/CSBVs毒株主要分离于东方蜜蜂(中华蜜蜂,命名为AC基因型),另一个分支的SBVs/CSBVs毒株主要分离于意大利蜜蜂(命名为AM基因型),AC基因型进一步分为几个分支,表现出地区差异性和宿主特异性。系统发育树的遗传进化关系也表明AmCSBV-SDLY与CSBV和其他亚洲SBVs/CSBVs分离株同属于一个分支,且AmCSBV-SDLY与CSBV-FZ(GenBank No.:KM495267.1)分离株遗传距离最近,这些结果进一步证明AmCSBV-SDLY属于CSBV。相似性分析与病毒重组分析,发现以AmCSBV-SDLY作为查询序列,源于意大利蜜蜂的AmCSBV-SDLY分离株与以前CSBV分离株具有高度的相似性,其相似度超过85%,与CSBV分离株形成了一个相对独立的分离群,与AmSBV-UK(GenBank No.:AF092924.1)分离株相似度远低于CSBV分离株,形成了明显的偏差,最大偏离度出现在2181 bp和2221 bp处,达到19.3%,但是仅CSBV-JL2014有重组信号,其重组片段总计有3段,一段来源于AmCSBV-SDLY分离株和两段来源于CSBV-FZ分离株,其次要亲本为CSBV-LN2009(GenBank No.:HM237361.1)。BootScan分析表明,分别以AmCSBV-SDLY和CSBV-JL2014(GenBank No.:KU57466.1)为查询序列,分别在1957-2162和6635-7110位点检测到AmCSBV-SDLY和CSBV-FZ的交叉重组信号。本实验首次证明CSBV能够突破种间屏障,自然感染意大利蜜蜂的幼虫,并引起其死亡,具有较强的致病性。本实验以分离到AmCSBV-SDLY作为毒种,制备CSBV灭活苗,用该疫苗免疫白来航母鸡,连续免疫3次,每次间隔2 w,并在每次免疫后7 d采集一次血,分离血清,以纯化的CSBV作为包被抗原,利用ELISA方法检测抗CSBV IgY的滴度,结果表明在首免疫后第14d开始,IgY抗体水平开始升高,到第42 d IgY抗体水平达到高峰,直至91 d仍能维持较高的抗体水平。收集首次免疫后42 d-91 d的鸡蛋,利用PEG和硫酸铵沉淀法进行抗CSBV的IgY纯化。选取2日-3日龄的幼虫作为培养体系,进行病毒中和实验,验证抗CSBV的IgY的病毒中和能力,同时分别在对2日-3日龄的幼虫接种CSBV后24 h和前24 h接种倍比稀释的抗CSBV的IgY进行幼虫保护实验,结果表明2日-3日龄的幼虫在接种CSBV前24 h,IgY滴度大于等于2~4时幼虫存活率达80%以上,而在CSBV接种后24 h,IgY滴度大于等于2~5时,幼虫存活率达80%以上,以上实验均重复3次,结果一致。根据以上结果,对已经确诊感染CSBV的400个中华蜜蜂群,用2~5的IgY进行治疗(10μL/只),治愈率为95%-100%,选取易感400个中华蜜蜂群,用滴度为2~4的IgY进行预防(10μL/只),保护率达97%。结果表明,用灭活的CSBV疫苗免疫母鸡制备的特异性IgY,可有效防治CSBV的发生,也将为中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese Sacbrood disease,CSBD)的综合防治提供技术支持。此研究具有重要的科学意义和广阔的社会应用前景。
Abstract
mi feng nang zhuang you chong bing du (Sacbrood virus,SBV)shi yi chong dui mi feng zhi bing xing jiao jiang de bing yuan ti ,ju you ming xian de su zhu te yi xing he de ou cha yi xing ,ji zhong gan ran zhong hua mi feng de (Apis.cerana)SBVbei chen wei zhong feng nang zhuang you chong bing du (Chinese Sacbrood virus,CSBV)。yi zhi yi lai CSBVyan chong wei xie zhao zhong hua mi feng yang shi ye de fa zhan ,yi dan fa sheng hui dui zheng ge yang feng ye zao cheng hui mie xing da ji ,dan zhi jin reng mo you xiao de fang zhi cuo shi 。ben yan jiu yu 2008nian -2017nian ji jian gong fen li de dao 31zhu CSBV,bing yi VP1ji yin wei ba ji yin jin hang le he gan suan ji ji tui dao an ji suan tong yuan xing fen xi he wei chuan jin hua guan ji fen xi ,ming que le wo guo mu qian CSBVliu hang zhu ju you ji ge fen zhi ,dan xin fen li de dao de du zhu su zhu te yi xing he ou yu cha yi xing yi jing fa sheng le gai bian 。zai ci ji jian ,ben yan jiu shou ci zai shan dong lin yi mou yi da li mi feng chang cong zi ran gan ran 、bing yin qi si wang de yi da li mi feng (Apis.mellifera)you chong yang ben zhong fen li dao yi zhu CSBV(ming ming wei :AmCSBV-SDLY,GenBank No.:MG733283.1),bing tong guo lin chuang guan cha 、dian jing jian ce 、SDS-PAGEjian ce 、qiong zhi ning jiao mian yi kuo san shi yan jian ce he you chong gong du shi yan dui CSBVjin hang le jian ding 。zai ci ji chu shang ,dui AmCSBV-SDLYji yin zu cheng ji jie gou jin hang le fen xi ,fa xian ji ji yin zu de he gan suan xu lie bao gua 8794 bp(bu bao gua poly A tail),jian ji A、U、Ghe Cde han liang fen bie wei 29.95%、29.22%、24.30%he 16.52%。he gan suan tong yuan xing da dao 86.8%-100%,you ji tui dao an ji suan de tong yuan xing da 86.2%-100%。bing yi CSBV/SBVbian ma ou quan ji yin zuo wei ba ji yin jin hang wei chuan jin hua fen xi ,jie guo xian shi suo you de SBVs/CSBVsfen li zhu xing cheng liang ge ming xian de fen zhi ,yi ge fen zhi de SBVs/CSBVsdu zhu zhu yao fen li yu dong fang mi feng (zhong hua mi feng ,ming ming wei ACji yin xing ),ling yi ge fen zhi de SBVs/CSBVsdu zhu zhu yao fen li yu yi da li mi feng (ming ming wei AMji yin xing ),ACji yin xing jin yi bu fen wei ji ge fen zhi ,biao xian chu de ou cha yi xing he su zhu te yi xing 。ji tong fa yo shu de wei chuan jin hua guan ji ye biao ming AmCSBV-SDLYyu CSBVhe ji ta ya zhou SBVs/CSBVsfen li zhu tong shu yu yi ge fen zhi ,ju AmCSBV-SDLYyu CSBV-FZ(GenBank No.:KM495267.1)fen li zhu wei chuan ju li zui jin ,zhe xie jie guo jin yi bu zheng ming AmCSBV-SDLYshu yu CSBV。xiang shi xing fen xi yu bing du chong zu fen xi ,fa xian yi AmCSBV-SDLYzuo wei cha xun xu lie ,yuan yu yi da li mi feng de AmCSBV-SDLYfen li zhu yu yi qian CSBVfen li zhu ju you gao du de xiang shi xing ,ji xiang shi du chao guo 85%,yu CSBVfen li zhu xing cheng le yi ge xiang dui du li de fen li qun ,yu AmSBV-UK(GenBank No.:AF092924.1)fen li zhu xiang shi du yuan di yu CSBVfen li zhu ,xing cheng le ming xian de pian cha ,zui da pian li du chu xian zai 2181 bphe 2221 bpchu ,da dao 19.3%,dan shi jin CSBV-JL2014you chong zu xin hao ,ji chong zu pian duan zong ji you 3duan ,yi duan lai yuan yu AmCSBV-SDLYfen li zhu he liang duan lai yuan yu CSBV-FZfen li zhu ,ji ci yao qin ben wei CSBV-LN2009(GenBank No.:HM237361.1)。BootScanfen xi biao ming ,fen bie yi AmCSBV-SDLYhe CSBV-JL2014(GenBank No.:KU57466.1)wei cha xun xu lie ,fen bie zai 1957-2162he 6635-7110wei dian jian ce dao AmCSBV-SDLYhe CSBV-FZde jiao cha chong zu xin hao 。ben shi yan shou ci zheng ming CSBVneng gou tu po chong jian bing zhang ,zi ran gan ran yi da li mi feng de you chong ,bing yin qi ji si wang ,ju you jiao jiang de zhi bing xing 。ben shi yan yi fen li dao AmCSBV-SDLYzuo wei du chong ,zhi bei CSBVmie huo miao ,yong gai yi miao mian yi bai lai hang mu ji ,lian xu mian yi 3ci ,mei ci jian ge 2 w,bing zai mei ci mian yi hou 7 dcai ji yi ci xie ,fen li xie qing ,yi chun hua de CSBVzuo wei bao bei kang yuan ,li yong ELISAfang fa jian ce kang CSBV IgYde di du ,jie guo biao ming zai shou mian yi hou di 14dkai shi ,IgYkang ti shui ping kai shi sheng gao ,dao di 42 d IgYkang ti shui ping da dao gao feng ,zhi zhi 91 dreng neng wei chi jiao gao de kang ti shui ping 。shou ji shou ci mian yi hou 42 d-91 dde ji dan ,li yong PEGhe liu suan an chen dian fa jin hang kang CSBVde IgYchun hua 。shua qu 2ri -3ri ling de you chong zuo wei pei yang ti ji ,jin hang bing du zhong he shi yan ,yan zheng kang CSBVde IgYde bing du zhong he neng li ,tong shi fen bie zai dui 2ri -3ri ling de you chong jie chong CSBVhou 24 hhe qian 24 hjie chong bei bi xi shi de kang CSBVde IgYjin hang you chong bao hu shi yan ,jie guo biao ming 2ri -3ri ling de you chong zai jie chong CSBVqian 24 h,IgYdi du da yu deng yu 2~4shi you chong cun huo lv da 80%yi shang ,er zai CSBVjie chong hou 24 h,IgYdi du da yu deng yu 2~5shi ,you chong cun huo lv da 80%yi shang ,yi shang shi yan jun chong fu 3ci ,jie guo yi zhi 。gen ju yi shang jie guo ,dui yi jing que zhen gan ran CSBVde 400ge zhong hua mi feng qun ,yong 2~5de IgYjin hang zhi liao (10μL/zhi ),zhi yu lv wei 95%-100%,shua qu yi gan 400ge zhong hua mi feng qun ,yong di du wei 2~4de IgYjin hang yu fang (10μL/zhi ),bao hu lv da 97%。jie guo biao ming ,yong mie huo de CSBVyi miao mian yi mu ji zhi bei de te yi xing IgY,ke you xiao fang zhi CSBVde fa sheng ,ye jiang wei zhong hua mi feng nang zhuang you chong bing (Chinese Sacbrood disease,CSBD)de zeng ge fang zhi di gong ji shu zhi chi 。ci yan jiu ju you chong yao de ke xue yi yi he an kuo de she hui ying yong qian jing 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自东北农业大学的孙莉，发表于刊物东北农业大学2019-08-27论文，是一篇关于中蜂囊状幼虫病毒论文,遗传进化分析论文,卵黄抗体论文,制备论文,东北农业大学2019-08-27论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自东北农业大学2019-08-27论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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