论文摘要
[目的]研究异种绒毛膜促性腺激素（恒河猴绒毛膜促性腺激素Macaca mulatta chorionic gonadotrophin,rmCG）β亚基DNA肿瘤疫苗的可能性,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。 [方法]（1）人工合成rmCGβ亚基全长cDNA编码序列构建真核质粒表达载体pcDNA3.1（+）-rmCGβ、pcDNA3.1（+）-Sig-Pr+-IgGFc-GPI和pcDNA3.1（+）-rmCGβ-Pr+-IgGFc-GPI,以PCR、限制性酶切和DNA序列测定进行鉴定;（2）BALB/c小鼠皮下接种Renca细胞,肌内注射法对其分别实施20μg,40μg,100μg pcDNA3.1（+）-rmCGβ,40μg pcDNA3.1（+）-rmCG β-Pr+-IgGFc-GPI核酸免疫,以40μg空载质粒为对照,以实体瘤重量评估核酸疫苗体内抑瘤效果;（3）通过脂质体转染的方法将目的基因导入B16小鼠黑色素瘤细胞,G418加压筛选,得到阳性克隆后扩大培养,经RT-PCR、流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法检测B16细胞中表达的IgGFc段融合蛋白;（4）将BALB/c小鼠分成rmCGβ治疗组和空载质粒对照组,分别经小鼠尾静脉注射转染rmCGβ与转染空载体的B16细胞,两周后观察小鼠肿瘤肺转移灶的个数。 [结果]成功合成rmCGβ亚基全长基因并构建真核质粒表达载体pcDNA3.1（+）-rmCGβ、pcDNA3.1（+）-Sig-Pr+-IgGFc-GPI和pcDNA3.1（+）-rmCGβ-Pr+-IgGFc-GPI;与空载质粒对照组相比,重组的质粒rmCGβDNA实验组均能诱导小鼠产生显著的抑瘤效果（p<0.01）;pcDNA3.1（+）-rmCGβ注射剂量在20μg至100μg之间的pcDNA3.1（+）-rmCGβDNA接种小鼠诱发的免疫反应强度与pcDNA3.1（+）-rmCGβDNA无剂量依赖关系;早用pcDNA3.1（+）-rmCGβDNA免疫接种BALB/c小鼠抑瘤效果优于晚用（p<0.05）。在相同剂量条件下,pcDNA3.1（+）-rmCG-Pr+-IgGFC-GPI与pcDNA3.1（+）-rmCGβDNA免疫接种BALB/c小鼠,抑瘤效果无明显差异。脂质体疫苗rmCGβ组小鼠肺部转移灶与空载质粒组相比明显减少,差异显著（p<0.01）。
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