人参强心滴丸对阿霉素心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

论文摘要

目的:人参强心滴丸（由人参、生地黄、蟾酥等药物组成）具有益气养阴,活血强心功效,为导师经临床观察筛选的效方,对充血性心力衰竭具有较好的治疗效果,为了进一步探讨其作用机理,参照相关文献运用阿霉素复制心力衰竭大鼠模型,同时施加药物干预,观察了其对心衰大鼠心功能和心肌细胞凋亡及相关调控基因的影响,探讨了其增强心功能和抗心肌细胞凋亡、保护心肌细胞的作用机制,并运用HE染色方法观察了本方对心肌组织形态学的影响。方法:选用Wister大鼠50只,体重160～180g,雌雄各半。大鼠自由饮水进食,饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。正常喂养一周后,随机分为5组:空白对照组（normal control group,N）、模型对照组（model group , M ）、人参强心滴丸高剂量组（ high-dose renshenqiangxindiwan group,H）、人参强心滴丸低剂量组（low-dose renshenqiangxindiwan group,L）、阳性药（心宝丸）（xinbaowan control group,X）对照组。除空白对照组外,其它各组边造模边进行治疗,各组1次/d灌胃,每次用药体积均按1ml/100g计算。参照相关文献,模型对照组大鼠腹腔注射盐酸阿霉素,按2mg/kg剂量溶于1ml生理盐水,每周一次,共注射六次,人参强心滴丸高、低剂量组以及阳性药对照组大鼠阿霉素给法同模型组,并用相应药物灌胃治疗,每天一次,共灌胃六周。正常对照组大鼠腹腔注射1ml生理盐水,每周一次,共注射六次。实验6周末,于最后一次给药禁食12h后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,行气管插管,人工呼吸（潮气量5ml,频率10次/min）,分离右颈总动脉及开胸分离升主动脉,0.3%肝素（2mg/kg）尾静脉注射,肝素化后右颈总动脉插管记录血压,心尖部插管记录左心室内压,主动脉根部安置2号电磁流量计探头,经MF-27型电磁流量计测量主动脉血流量,用RM-6000型八导生理仪记录心率（HR）、收缩压（ABP）、舒张压（ADP）、每搏流量（SV）、左室收缩内压（LVSP）、左室内压最大变化速率（±dp/dtmax）和心输出量（CO）。在心尖部取绿豆粒大小的组织,生理盐水洗净血液,滤纸吸干水分,70%乙醇溶液固定,4℃冰箱冷贮待检,采用美国Beckman Coulter公司生产的Epics-XLⅡ型流式细胞仪,应用Expo32ADC进行免疫荧光数据分析,用MuticycleAV分析软件对DNA细胞周期拟合分析。并留取心肌组织,HE染色,光镜下观察心肌组织形态学变化。结果:1一般行为观察实验期间,空白组生长良好,饮食正常,反应灵敏。模型组大鼠逐渐出现皮毛凌乱,色枯无泽,甚有少量脱落,形体消瘦,蜷卧扎堆,活动减少,精神萎靡,尿液减少,食欲下降,水肿,爪甲紫绀等症状和体征。高剂量组、低剂量组和心宝丸组大鼠情况均较模型组为轻。2人参强心滴丸对心力衰竭大鼠心肌组织形态学的影响结果显示,空白组心肌细胞纹理清晰,走形正常,胞浆着色均匀,间质细胞无增生,间质无扩张充血。模型组心肌纤维着色不均,部分心肌呈典型颗粒样变性表现为胞浆浅染,可见浆内充满细小粉红染颗粒,纹理消失,间质轻度水肿,灶性间质细胞增生,部分可见灶性心肌纤维走形中断,心肌细胞核萎缩,染色变深。高剂量组、低剂量组、心宝丸组心肌损害均较模型组减轻,心肌纤维有轻度颗粒样变性,间质无明显充血。3人参强心滴丸对心衰大鼠心功能的影响模型组大鼠心脏收缩及舒张功能明显障碍,CO较正常组减少（p<0.05）,LVSP和+dp/dtmax较正常组明显降低（p<0.05或p<0.01）,经药物治疗后,各治疗组CO增加（p<0.05或p<0.01）,LVSP和+dp/dtmax上升（p<0.05或p<0.01）,显示心功能显著改善。4人参强心滴丸对心衰大鼠心肌细胞凋亡率的影响模型组与正常组比较,模型组心肌细胞凋亡率（即AP值）显著高于正常组（P<0.05）。经药物治疗后,各治疗组与模型组比较,细胞凋亡率均明显减小（P<0.01）。其中,低剂量组高于高剂量组（P<0.05）,而阳性药对照组与高低剂量组比较无明显差异（P>0.05）。5人参强心滴丸对心衰大鼠心肌细胞增殖周期变化的影响模型组G0/G1期细胞百分率较正常组显著升高（P<0.05）,而S期和G2/M期细胞百分率均较正常组降低（P<0.05）。经用药干预后,高、低剂量组及对照组G0/G1期细胞百分率明显低于模型组（P<0.01）,而S期和G2/M期细胞百分率显著高于模型组,（P<0.05或P<0.01）。低剂量组G0/G1期和G2/M期细胞百分率高于高剂量组（P<0.05）,但高剂量组与对照组之间各项指标变化无明显差异（P>0.05）。与正常组比较,模型组心肌细胞PI值显著降低（P<0.05）,经用药干预后,高、低剂量组和对照组心肌细胞PI值均较模型组显著增高（P<0.01）,说明各治疗组细胞增值速度高于模型组。与高剂量组比较,低剂量组大鼠心肌细胞PI值低于高剂量组。阳性药对照组PI值高于低剂量组（P<0.05）,高剂量组与阳性药对照组之间比较无明显差异（P>0.05）。6人参强心滴丸对实验性心衰大鼠心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响模型组与正常组比较,心衰大鼠心肌细胞凋亡率明显增高（P<0.01）,而Bax蛋白表达FI值、Bax/Bcl-2比值显著升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达FI值显著降低（P<0.05）;经用药干预后,高、低剂量组和对照组Bax蛋白表达FI值、Bax/Bcl-2比值显著降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达FI值显著升高（P<0.05）,说明随凋亡率增加,Bax蛋白表达量也增加,而Bcl-2蛋白表达量则随凋亡率增加而减少。各用药组中低剂量组Bax蛋白表达FI值和Bax/Bcl-2比值均高于高剂量组（P<0.05）;高剂量组与阳性药对照组之间各项指标无明显差异（P>0.05）。结论:1人参强心滴丸可明显改善心衰大鼠心肌组织学的病变程度,表现为用药后心肌细胞颗粒样变性减轻或消失,心肌纤维排列整齐,间质无明显扩张充血。说明本方对心肌细胞有保护作用。2人参强心滴丸可明显改善心衰大鼠的左室收缩内压（LVSP）、左室内压最大变化速率（+dp/dtmax）和心输出量（CO）,能够增强心功能。3人参强心滴丸能通过促进Bc1-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,降低心肌细胞凋亡率,以保护心肌细胞,从而达到抗心力衰竭作用,此可作为人参强心滴丸治疗心力衰竭的作用机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 研究论文 人参强心滴丸对阿霉素心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响
• 引言
• 第一部分 人参强心滴丸对阿霉素心衰大鼠心功能及心肌组织形态学的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 人参强心滴丸对阿霉素心衰大鼠心肌细胞凋亡及相关调控基因的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 结论
• 综述 中医药治疗充血性心力衰竭的研究近况
• 致谢
• 个人简历