论文摘要
研究背景：白细胞在内皮下的募集是动脉粥样硬化一个很重要的特征，而oxLDL正是这一募集过程的重要诱因。oxLDL可刺激内皮细胞分泌粘附分子、选择素和趋化蛋白等炎性因子，进而促使白细胞对内皮细胞的粘附，迁移至内皮下。TLR4作为oxLDL在内皮细胞上非常重要的受体可能参与了该过程，但其作用机制尚不完全明了，有待进一步的研究。第一部分oxLDL对HUVECs表达TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影响目的：观察不同浓度oxLDL对HUVECs表达TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影响。方法：待HUVECs细胞融合度达到80%后，更换新鲜无血清1640培养基使细胞同步在G0期，12h后再换新鲜培养基并加入不同浓度的oxLDL（0、20、40、60、80μg/mL）孵育HUVECs，24h后用RT-PCR检测不同浓度oxLDL对HUVECs表达TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA的影响，48h后用Western blot检测蛋白表达影响。结果：oxLDL浓度依赖性地上调人脐静脉内皮细胞TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA以及蛋白的表达。oxLDL在20μg/mL时即有显著作用（P<0.05）,且随着oxLDL浓度的升高，TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA和蛋白表达水平均呈浓度依赖性上升趋势；与0μg/mL相比，80μg/mL组TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA和蛋白的表达上调最为显著（P<0.001）。第二部分TLR4/NF-κB信号通路在oxLDL上调HUVECs表达LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及机制研究目的：检测TLR4和NF-κB在oxLDL上调HUVECs表达LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及调节机制。方法：用siTLR4转染HUVECs，Western blot检测LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表达及NF-κB（P50）核易位；NF-κB特异性抑制剂PDTC处理HUVECs48h，Western blot检测TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1蛋白表达。结果：siTLR4显著降低了LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表达且降低了NF-κB（P50）的核易位现象（P<0.001），PDTC显著抑制了TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的蛋白表达（P<0.001）。结论：oxLDL浓度依赖性地上调人脐静脉内皮细胞TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的表达；TLR4/NF-κB信号通路在oxLDL上调HUVECs表达LOX-1、MCP-1、VCAM-1中起重要作用。
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