衰老雄性大鼠脂质过氧化对血清睾酮水平和bcl-2、caspase-3基因表达的相关研究

论文摘要

背景与目的近年来，大量的研究表明，在衰老进程中机体内氧化与抗氧化系统之间的平衡发生变化，表现为氧化作用增强、抗氧化能力减弱，而细胞代谢异常产生大量活性氧ROS如超过抗氧化体系的还原能力，使细胞处于氧化应激状态，将影响到细胞功能状态，甚至引起凋亡相关基因表达的改变，激活细胞凋亡程序。为了减少有氧代谢过程中ROS对细胞的损害，细胞内有一系列有效的抗氧化防御机制，包括清除ROS的抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）等和阻断过氧化链式反应的生育酚、谷胱甘肽和抗坏血酸等。通常细胞处于氧化与抗氧化平衡中而维持着正常的功能，一旦氧化与抗氧化作用失衡，将会影响到细胞的功能。在衰老过程中，中老年男性出现雄激素部分缺乏，由此引起一系列的临床症状，但由于老年男性受到老龄合并疾病因素的影响，本实验拟建立D-半乳糖大鼠亚急性衰老模型研究脂质过氧化对血清睾酮水平、睾丸间质细胞bcl-2和caspase-3基因表达情况以及睾丸间质细胞的超微结构的影响，探讨衰老过程中脂质过氧化对血清睾酮水平的影响。材料和方法动物：SD大鼠20只，2～3月龄，体重（200±20）g，随机分成正常对照组、D-半乳糖组，每组10只。所有大鼠同室分笼饲养，自然光照，自由饮水进食，室温，相对湿度50～60％。正常对照组每日腹部皮下注射生理盐水（0.2ml／100g）6周；D-半乳糖组每日腹部皮下注射经高压灭菌D-半乳糖（200mg／kg）6周。于第6周末最后一次注射后48h，大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（45mg／kg）麻醉，剪开阴囊，分离睾丸周围组织，结扎睾丸动脉，迅速取下左侧睾丸，称重，匀浆，分别检测组织中SOD、MDA、GSH-PX的水平，并取部分睾丸组织经2.5％戊二醛液固定，常规制作超薄片，用透射电镜观察超微结构；开胸暴露心脏，迅速从心尖部进针取血2ml，低温离心分离血清，置于4℃冰箱中保存，用于放射免疫法检测血清T；再剪开左心室插入灌注针头至升主动脉，用止血钳固定，剪开右心房，快速灌注生理盐水（室温）100～150ml，待血液冲洗干净后（肝脏变白），即灌注4％多聚甲醛（4℃）500ml。取下右侧睾丸后，用4％多聚固定过夜，常规石蜡包埋、切片，检测睾丸间质bcl-2、caspase-3基因表达。结果与正常对照组相比，D-半乳糖组Leydig细胞中内质网、线粒体数量减少；（1）SOD活性：D-半乳糖（D）组（116±18.09）NU／mgprot显著低于对照（C）组（156±31.02）NU／mgprot)（p＜0.01）；（2）MDA含量：D组（1.77±0.41）nmol／mgprot明显高于C组（1.19±0.15）nmol／mgprot（p＜0.05）；（3）GSH-PX水平：D组（29.84±3.79）U／mgprot显著降低于C组（35.29±4.50）U／mgprot（p＜0.05）；（4）血清T：D组（0.69±0.26）ng／ml显著低于C组（2.58±0.73）ng／ml（p＜0.01）；（5）bcl-2表达：D组（35.1±3.6）％明显低于C组（49.6±7.4）％（p＜0.01）；（6）caspase-3表达：D组（11.3±1.8）％明显高于C组（9.1±1.3）％（p＜0.01）。结论衰老大鼠睾丸组织脂质过氧化的变化影响Leydig细胞超微结构、血清T水平和Leydig细胞bcl-2、caspase-3基因表达。

论文目录

• 缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第1章 前言
• 第2章 材料和方法
• 第3章 结果
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 第6章 展望
• 第7章 附图
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢