鳖甲炮制前后抗肝纤维化药效物质及其质量分析比较研究

论文摘要

鳖甲为传统中药,来源于鳖科动物鳖（Trionyx sinensis Wiegmann）的背甲,具有滋阴潜阳,软坚散结,退热除蒸的功效,收载于历年版《中国药典》；主要用于治疗阴虚发热,虚风内动,癥瘕等病症。生鳖甲质地坚硬,具腥臭气,养阴清热,潜阳熄风之力较强,主要用于内伤虚热或热病伤阴,虚风内动等证；制鳖甲软坚散结之力较强,主要用于癥瘕积聚,月经停闭,阴虚潮热。砂炒醋淬后,质地变得疏松,从而易于粉碎及煎出有效成分,并能矫臭矫味。醋制具有解毒、收敛、散瘀止痛的作用；醋制还能增强药物入肝消积,软肝散结的作用。本论文在中医药理论指导下,通过多学科交叉的研究方法,采用现代科学技术,对鳖甲炮制前后的药理作用、化学成分以及质量分析进行了比较研究。采用超声和回流两种提取方式,分别对鳖甲药材炮制前后的肝星状细胞的增殖抑制作用进行了比较研究,结果表明回流提取法的药理效果较佳,且炮制后的鳖甲药理作用优于生鳖甲。采用膜透析分离的方法将醋鳖甲回流提取物分为不同分子量段的物质部位,肝星状细胞增殖影响的活性筛选结果表明,分子量在3000-4000范围的肽类物质为鳖甲抗肝纤维化活性物质部位。采用高效毛细管电泳（HPCE）分析方法,分别测定了同一产地十批生鳖甲与十批醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位的指纹图谱,并对炮制前后的指纹图谱进行了分析比较。生鳖甲指纹图谱共标定了17个共有峰,其相似度均大于0.94；醋鳖甲指纹图谱共标定了19个共有峰,其相似度均大于0.93。通过对炮制前后鳖甲指纹图谱的比较,以及从鳖甲中分离和筛选得到的活性肽类成分的归属分析,发现鳖甲炮制后不仅化学成分的含量发生了变化,且炮制后产生了一些新的化学成分。首次采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法,对鳖甲炮制前后药材进行了鉴别,并分别计算出炮制前后鳖甲主要蛋白的分子量。采用现代分析方法,对炮制前后鳖甲药材的性状、浸出物（水溶性浸出物和醇溶性浸出物）、检查（水分、灰分、酸不溶性灰分）和肽类含量等进行了系统研究,制定了较完善的质量控制标准,为再版《中国药典》修订鳖甲药材的质量标准提供了参考依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文缩略词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 鳖甲炮制前后化学成分的研究概况
• 2 肽类物质含量测定方法
• 第二章 鳖甲炮制前后抗肝纤维化的生物活性比较研究
• 第一节 鳖甲炮制前后两种方法提取物抗肝纤维化生物活性比较研究
• 1 仪器与试药
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第二节 醋鳖甲抗肝纤维化活性肽类物质的分离与药理筛选
• 1 仪器与试药
• 2 鳖甲抗肝纤维化活性组分的提取分离
• 3 鳖甲抗肝纤维化活性组分对肝星状细胞增殖的影响
• 4 讨论
• 第三章 鳖甲炮制前后抗肝纤维化有效物质部位指纹图谱的成分分析比较研究
• 1 仪器与试药
• 2 实验方法与结果
• 3 指纹图谱的建立
• 4 讨论
• 第四章 鳖甲炮制前后的质量分析比较研究
• 第一节 鳖甲炮制前后的SDS-PAGE鉴别
• 1 仪器与试药
• 2 方法与结果
• 3 讨论
• 第二节 鳖甲炮制前后的质量分析研究
• 1 仪器与试药
• 2 方法与结果
• 3 讨论
• 结语与创新
• 已发表和待发表论文
• 参考文献
• 致谢