骨髓间充质干细胞移植联合FK506对大鼠脊髓损伤后功能恢复及脊髓再生的研究

论文摘要

目的骨髓间充质干细胞(BMSC)体外培养，将其局部注射于脊髓损伤一周后大鼠脊髓的远近端，同时应用免疫抑制药物他克莫司(FK506)，观察两者对脊髓损伤后再生的影响；初步探讨FK506的对脊髓损伤后的再生作用。方法取1月龄SD大鼠(雌雄不限)经拉颈椎法处死，无菌条件下取出双侧股骨和胫骨，剪开两端髓腔，将骨髓腔内的骨髓冲出至无菌平皿，制成细胞悬液，置于培养箱中，3天后首次换液，倒置相差显微镜下逐日观察细胞的形态，贴壁情况及生长情况。经多次传代扩增培养，使rBMSC逐渐得到纯化和扩增。钳夹法制作大鼠急性脊髓损伤动物模型30只，以伤后后肢强烈痉挛和尾巴旋转一周为入选标准，随机分成3组。A组为单纯损伤组，B组为单纯骨髓干细胞移植组，C组为骨髓干细胞联合FK506组。B、C两组一周后再次手术，暴露出原脊髓损伤处，将体外培养的骨髓间充质干细胞用微量注射器分别于损伤远近端注入脊髓损伤区域，C组同时腹腔注射FK506一次。期间加强动物的护理，于伤后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分及斜板实验观察神经恢复情况。8周后取材，行免疫组化检查及病理学检查。结果B、C两组大鼠后肢运动功能均有较明显的恢复，B、C组注射细胞后2周开始出现后肢活动，逐步恢复排尿，伤后4周变化最为明显，可见明显后肢活动和尾巴的摆动，伤后8周，已可见协调运动，C组的恢复情况较B组为快，BBB最高评分可达14分，两组统计学上有差异(P＜0.05)。A组亦有所恢复，但程度较轻。C组与A组在6周以后的评分有显著性差异(P＜0.01)。A组切片见伤处为瘢痕连接，结构紊乱，邻近有明显空洞形成，未见神经轴索通过。B、C组亦见瘢痕形成，但可见少量神经轴索样结构。免疫组化显示：A组伤处邻近神经元胞体NF200阳性细胞较少，邻近脊髓组织GFAP阳性细胞亦较少。B组伤处可见GFAP及NF阳性纤维，但排列较紊乱，无正常结构。C组较B组邻近脊髓神经元胞体NF200阳性细胞较多，GFAP阳性细胞亦较多。C组大鼠脊髓损伤边缘Nogo阳性神经元较A、B两组明显减少。结论完全性脊髓损伤的大鼠存在一定的后肢功能恢复现象，移植的大鼠骨髓间质干细胞在脊髓损伤部位能长期存活，并能向邻近脊髓内迁徙。骨髓间质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用，联合应用FKS06有协同效果。脊髓损伤后的恢复的微环境需要多个因素的共同作用，FK506是其中的一个有利因素。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 论文正文 骨髓间充质干细胞移植联合FK506对大鼠脊髓损伤后功能恢复及脊髓再生的研究
• 前言
• 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养
• 1 材料
• 2 实验方法
• 第二部分 骨髓间充质干细胞移植联合FK506对大鼠脊髓损伤后功能恢复及脊髓再生的研究
• 1 材料
• 2 方法
• 结果
• 1、BBB评分与斜板实验和脊髓功能评分结果
• 2、荧光显微镜检查结果
• 3、组织学观察及免疫组化结果
• 4、Nogo免疫组化染色结果
• 讨论
• 一、移植细胞来源的选择
• 二、脊髓损伤动物模型的选择和制作
• 三、大鼠脊髓损伤后相关护理的体会
• 四、检测结果讨论
• 五、应用FK506治疗脊髓损伤的可能性
• 小结
• 一、脊髓损伤后神经功能恢复有利方面
• 二、脊髓损伤后神经功能恢复不利方面
• 三、SCI修复的策略和突破性的进展
• 四、神经再生应用于临床方面
• 五、计划今后治疗方面
• 六、脊髓损伤在我国的治疗现状
• 七、目前中国脊髓损伤协作网所开展的治疗状况
• 参考文献
• 在学期间发表论文及参与科研情况
• 致谢
• 附图