黄曲霉毒素B1免疫层析试纸条快速检测方法的研制

黄曲霉毒素B1免疫层析试纸条快速检测方法的研制

论文摘要

本研究首先将AFB1先转变成AFB2a后,再与蛋白耦连制备完全抗原,以期制备的抗体能与黄曲霉毒素更多种类反应。成功制备了AFB2a单克隆抗体的基础上,建立了两种竞争性ELISA检测方法,并利用直接法组装了ELISA试剂盒,检测限为2ng/mL,优于国家标准和国外的检测方法。验证了单抗在体内外中和毒素的能力。以柠檬酸三钠为还原剂,制备了20nm胶体金颗粒,以此胶体金标记纯化的单抗,在筛选试纸条材料的基础上,以标记抗体做为试剂组装了试纸条,并优化了抗体印记条件。组装的试纸条与AFB2、M1、M2有反应特异性,对标准毒素AFB1最低检测限为5ng/mL。

论文目录

  • 提要
  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 综述一 黄曲霉毒素检测方法的国内外研究进展
  • 综述二 黄曲霉毒素B2a 的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • 实验一 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备与鉴定
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 2.1 杂交瘤细胞筛选结果及间接ELISA 效价
  • 2.2 单抗特异性鉴定
  • 2.3 亚类鉴定结果
  • 2.4 杂交瘤细胞的染色体鉴定
  • 2.5 单抗的相对亲和力测定结果
  • 2.6 单抗的纯化结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 实验二 单克隆抗体及抗独特型抗体的保护作用
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 2.1 体外中和试验
  • 2.2 体内中和试验
  • 2.3 免疫4G6 的家兔和血清滴度测定
  • 2.4 抗独特型抗血清滴度的测定
  • 2.5 抗独特型Ab2 抗体的免疫保护作用
  • 2.6 AFT 经口中毒小鼠实验结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 实验三 AFT ELISA 检测方法的建立及试剂盒的组装
  • 1 材料与方法
  • 2 结果与分析
  • 2.1 ELISA 反应条件确定
  • 2.2 间接竞争ELISA 反应曲线
  • 2.3 直接竞争ELISA 及试剂盒反应标准曲线
  • 2.4 样品添加回收率
  • 2.5 重复性试验
  • 2.6 稳定性试验
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 实验四 黄曲霉毒素B1免疫层析检测方法的研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果与分析
  • 2.1 羊抗鼠血清纯化结果
  • 2.2 胶体金的电镜观察
  • 2.3 胶体金的紫外扫描结果
  • 2.4 胶体金标记抗体的透射电镜的鉴定
  • 2.5 胶体金颗粒大小的确定
  • 2.6 标记抗体量
  • 2.7 金标抗体稀释度的确定
  • 2.8 试纸条测试标准毒素结果
  • 2.9 试纸条使用效果的初步评价
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻读博士期间发表的主要论文及成果
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师及作者简介
  • CURRICULUM VITAE
  • 相关论文文献

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