论文摘要
背景及目的：以微管为作用靶点的化疗药物，如紫杉醇、长春新碱等，能诱导多种恶性肿瘤（包括胃癌）细胞凋亡，但不同细胞株的凋亡敏感性有很大差别；自噬本是细胞一种正常的生理活动，但近年来研究发现在一些治疗因素下，肿瘤细胞中异常的自噬活动能影响肿瘤细胞的转归，一方面，自噬会导致某种形式的程序性细胞死亡，凋亡和自噬性细胞死亡可能作为彼此的后备机制执行不可逆细胞死亡的指令，另一方面，自噬可能是肿瘤细胞的一种保护机制，减轻了不良因素对细胞凋亡的诱导作用。目前国内外尚无关于自噬及自噬性细胞死亡在化疗诱导胃癌细胞死亡中作用的报道。本研究旨在了解胃癌细胞在对微管作用化疗药物的反应中自噬和自噬性细胞死亡的存在，以及自噬和凋亡的相互关系，从而对促进胃癌细胞对化疗药物的敏感性提出新的思路。方法：Annexin V／PI双染流式细胞术和MTT法分别检测紫杉醇、长春新碱诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率，死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡，吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在，免疫印记法检测Beclin 1蛋白表达，自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和紫杉醇共同作用抑制细胞自噬后流式细胞术检测细胞凋亡率的变化，caspase广谱抑制剂（z-VAD-FMK）和紫杉醇共同作用抑制细胞凋亡后流式细胞术检测细胞自噬率的变化。结果：1．紫杉醇和长春新碱可以诱导胃癌SGC-7901和BGC-823细胞凋亡，并且具有剂量和时间依赖性，但两株细胞对药物诱导的凋亡敏感性不同。紫杉醇0.1μmol／l、长春新碱50μg／ml作用于SGC-7901细胞48h凋亡率达50％，作用于BGC-823细胞48h凋亡率分别为34.57％±5.55％和38.90％±1.27％，所以，BGC-823细胞相对SGC-7901细胞为对紫杉醇、长春新碱诱导的细胞凋亡不敏感细胞株。由细胞凋亡率和总死亡率之间的显著差别，并结合死亡细胞DAPI染色结果证明紫杉醇、长春新碱可以诱导胃癌细胞出现非凋亡性细胞死亡，死亡细胞吖啶橙染色荧光显微镜检测结果提示这种非凋亡性细胞死亡是自噬性细胞死亡，辅助免疫印记实验的结果证实了自噬性细胞死亡的存在并且与Beclin 1基因激活有关。2．紫杉醇、长春新碱处理SGC-7901和BGC-823细胞早期（24h内）即可出现明显的细胞自噬性变化，紫杉醇诱导的自噬高峰期出现在药物作用3h-6h，长春新碱诱导的自噬高峰期出现在药物作用24h-36h，并且BGC-823细胞相对为对紫杉醇、长春新碱诱导的细胞自噬敏感的细胞株，用3-MA抑制自噬可以促进药物诱导的胃癌细胞凋亡，用z-VAD-FMK抑制凋亡对药物诱导的胃癌细胞自噬没有影响。结论：微管作用化疗药物紫杉醇和长春新碱既可以诱导胃癌细胞凋亡，又可以诱导胃癌细胞自噬及自噬性细胞死亡，这种自噬／自噬性细胞死亡与Beclin 1的表达上调有关，药物诱导的胃癌细胞自噬活动出现在凋亡之前并可以拮抗细胞凋亡的发生。