rhIL-24、EGCG对肺癌生长和肿瘤血管生成抑制的基础研究

论文题目: rhIL-24、EGCG对肺癌生长和肿瘤血管生成抑制的基础研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学呼吸

作者: 朱晔涵

导师: 胡华成

关键词: 肺癌,凋亡,血管生成

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的: 本研究拟构建新的pET-21a-IL-24 重组质粒表达系统,并在大肠杆菌中获得稳定的高效表达,将表达产物纯化、复性后得到部分纯化人重组白细胞介素24(rhIL-24)蛋白。检测其刺激外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子的生物学活性,观察其在体内外对肺癌细胞生长的抑制效应、凋亡效应以及抗肿瘤血管生成作用。为原核表达IL-24 蛋白重组药物的研制奠定实验基础。茶多酚主要成分EGCG 也具有高效无毒的抗肿瘤特性,本实验择其与IL-24 进行比照研究。方法: 以pBV220-IL-24 载体为模板,以上游含有BamHI 酶切位点,下游含有XhoI 酶切位点的hIL-24 引物进行PCR 扩增,将pET-21a(+)质粒和PCR 产物双酶切后用胶回收试剂盒回收目的片段,再连接过夜,转化DH5α感受态细胞,PCR 鉴定重组子后测序。将测序正确的pET-21a(+)-IL-24 重组质粒抽提后转化BL21 菌株,挑取阳性克隆。振荡培养过夜。接种LA 培养基,摇菌至OD600≈0.4~0.6 时,加入IPTG,经诱导不同时间(2、3、4、5 小时)后,分别取样。离心取菌体,超声破碎,将包涵体进行洗涤,溶包,复性后透析,获得部分纯化rhIL-24蛋白,Western-blotting 方法对其进行鉴定。用ELISA 法检测rhIL-24 蛋白刺激PBMC 分泌IL-6、IFN-γ和TNF-α的活性。用MTT 法评价rhIL-24、EGCG 对A549 肺癌细胞生长的影响,绘制细胞生长曲线,获得rhIL-24 和EGCG 的半数细胞抑制所需药物浓度值(IC50)。通过FCM 检测rhIL-24 和EGCG 对A549 肺癌细胞生长周期和凋亡的影响。观察rhIL-24 和EGCG 对鸡胚尿囊膜(CAM)微血管生成的影响。在建立的人肺癌裸鼠移植瘤模型上观察rhIL-24 和EGCG 对瘤体生长的抑制作用,用免疫组化法检测肿瘤组织中CD34 和NF-κB 的表达。结果: 构建的原核表达载体pET-21a(+)-IL-24,经双酶切和PCR 鉴定原核表达质粒构建正确。菌体裂解后呈现的18.5KD 左右的蛋白条带与预期理论值一致。Western-Blotting 检测发现,融合蛋白能与抗IL-24 抗体发生特有性反应。用IPTG 诱导后,rhIL-24 在大肠杆菌中获高效表达。经rhIL-24 刺激PMBC48 小时后,IL-6、IFN-γ、TNF-α的浓度上升,至72 小时分泌达到高峰,

论文目录:

引言

第一部分

第二部分

第三部分

第四部分

第五部分

结论

发表、待发表文章和获奖项目

附录

致谢

详细摘要

发布时间: 2006-03-24

参考文献

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rhIL-24、EGCG对肺癌生长和肿瘤血管生成抑制的基础研究

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