论文题目: 蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的条件优化
论文类型: 硕士论文
论文专业: 内科学
作者: 金世辉
导师: 刘必成
关键词: 蛋白质微阵列,载体,琼脂糖
文献来源: 东南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:蛋白质微阵列载体的选择和表面修饰是影响微阵列质量的关键因素之一,蛋白质微阵列载体不但要能固定足够量的蛋白质还要使固定在其表面的蛋白质保持天然活性。在过去的研究中发现,琼脂糖膜具有三维多孔结构,经过水化后在其内部形成了固-液状态的水凝胶结构,这种三维、多孔结构以及湿润的微环境不但能固定足够的蛋白质同时可以防止蛋白质变性失活。该实验的目的就是以琼脂糖修饰的玻片作为蛋白质微阵列载体,建立一种以琼脂糖修饰玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法。并比较琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片以及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。方法:配制不同浓度的琼脂糖溶液,加热沸腾后铺在洁净的玻片上,烘箱烤干后制成微阵列载体。将羊IgG固定在经过活化的载体表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3标记的兔抗羊IgG,孵育,洗涤后用共聚焦激光扫描仪获取图像,检测各点的荧光强度,根据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度,最佳NaIO4浓度,最佳固定时间以及封闭时间等实验条件,并和醛基修饰表面以及氨基修饰表面进行比较。结果:当琼脂糖浓度为1.2%、NaIO4浓度为20mmol/L、固定时间为1小时、孵育时间为45分钟时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。在固定的抗体浓度相同的情况下琼脂糖修饰玻片荧光强度是醛基修饰玻片的2.6倍,是氨基修饰玻片的9倍。结论:本实验确立了蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的优化条件,用该优化条件制备的琼脂糖玻片更适合用于蛋白质微阵列载体。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
文献综述
材料和方法
结果
讨论
参考文献
结论
致谢
作者简介
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发布时间: 2007-06-11
参考文献
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