妊娠标记蛋白PAPPA，PLAC8和PAG mRNA在妊娠奶牛外周血浆中的丰度变化

论文摘要

奶牛妊娠期特异表达蛋白可作为妊娠标记蛋白。本研究旨在探究妊娠相关血浆蛋白A （PAPPA）、妊娠特异蛋白8（PLAC8）和妊娠相关糖蛋白（PAG）三种妊娠标记蛋白在奶牛妊娠期外周血血浆中的表达规律,以筛选妊娠早期优势奶牛胎盘活性物质,为奶牛早期妊娠诊断提供依据。本研究采集奶牛空怀期、妊娠30d、60d、90d、150d和240d血浆,采用柱式病毒RNAout试剂盒提取血浆中游离的胎儿RNA,通过RT-PCR分析三种妊娠标记蛋白的mRNA的表达水平。本研究主要分为两个部分：一、奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取由于血浆中胎儿游离RNA含量极少且存在形式特殊,提取出高质量的RNA存在着一定的困难,因此本试验中提取胎儿游离RNA是研究的一个重要环节。试验对比了常规RNA提取和柱式病毒RNAout试剂盒提取两种方法,结果显示：用普通的RNA提取方法不能获得血浆中游离的RNA,而采用柱式病毒RNAout试剂盒可以从血浆中提取出高质量的RNA。二、奶牛妊娠期外周血中PAPPA, PLAC8和PAG的mRNA表达规律在妊娠奶牛,PAPPA, PLAC8和PAG都可以作为一种妊娠标记蛋白。据目前的研究报道,PLAC8和PAG仅由胎盘组织分泌表达,具有妊娠特异性；PAPPA在其他组织也有微量表达,但表达水平远低于胎盘。本研究显示：（1）与空怀组相比,妊娠期血浆中的PAPPA的mRNA水平显著提高（P<0.05）,而妊娠150d组与空怀组相比则差异极显著（P<0.01）; （2） PLAC8是一种只在妊娠期表达的胎盘特异性蛋白,在未孕牛无表达,所以本试验以妊娠30d的数据为阴性对照,结果显示,其在妊娠150d表达量最高,在妊娠240d时表达量最低。而在妊娠早期,妊娠60d时表达量高于30d和90d。在妊娠中期（150d） PLAC8的表达量又逐渐增加并高于妊娠前期,随后又降至最低值；（3）与空怀期相比,在整个妊娠过程中PAG的mRNA表达量随妊娠期的延长而增加,妊娠30d、90d和150d显著高于空怀期（P<0.05）,妊娠60d和240d时极显著地高于空怀期（P<0.01）。结论：本研究表明,PAG可作为奶牛妊娠早期优势表达蛋白,对其表达调节和功能进行深入研究,可为奶牛早期无创性妊娠诊断提供重要的理论依据及一种新的思路。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语中英文对照
• 第一章 文献综述
• 1 奶牛早期妊娠诊断研究进展
• 1.1 超声波诊断法
• 1.2 血小板计数法
• 1.3 早孕因子诊断法
• 1.4 血清酸滴法
• 1.5 放射免疫和酶免疫测定法
• 1.6 碱性磷酸酶活力测定法
• 1.7 胶体金双抗夹心法
• 1.8 乳胶凝集抑制试验
• 1.9 宫颈-阴道粘液电导率测定法
• 2 基于外周血中胎儿游离RNA的奶牛早期妊娠诊断技术
• 2.1 母体外周血中胎儿游离RAN的发现
• 2.2 胎儿游离RNA的来源及其存在形式
• 2.3 研究现状和应用前景
• 3 奶牛胎盘活性物质的研究进展
• 3.1 调节肽
• 3.2 生长因子
• 3.3 细胞因子
• 3.4 其他生物活性物质
• 4 PAPPA,PLAC8和PAG的研究进展
• 4.1 妊娠相关血浆蛋白A（PAPPA）
• 4.2 妊娠特异蛋白8（PLAC8）
• 4.3 妊娠结合糖蛋白（PAG）
• 5 小结
• 参考文献
• 试验一 奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 常规RNA提取检测结果
• 2.2 柱式病毒RNAout试剂盒检测结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 试验二 PAPPA,PLAC8和PAG的MRNA在妊娠奶牛外周血中的表达规律
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.3 数据分析
• 2 结果及分析
• 2.1 RT-PCR产物特异性
• 2.2 PAPPA,PLAC8和PAG的mRNA在奶牛妊娠期外周血中的表达规律
• 3 讨论
• 3.1 PAPPA
• 3.2 PLAC8
• 3.3 PAG
• 3.4 适于奶牛早期妊娠诊断的优势表达基因的筛选
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢