IgA肾病肾小管间质损伤及无创性标志物相关研究

论文摘要

背景与目的:IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病,大多数患者进行性发展,约15-40%的患者在发病10-20年后进展到终末期肾病（ESRD）。肾小管间质损伤（tubulointerstitial lesions,TIL）是影响IgAN预后的重要危险因素。肾活检是目前诊断IgAN、判别其TIL的重要手段。由于肾活检的有创性和风险性,难以反复施行,使许多患者延误了诊断和及时治疗,也不能有效随访病情及观察疗效,因此临床上迫切需要建立无创性诊断手段及寻找无创性标志物。本研究1.通过对IgAN患者的临床病理资料多因素logistic回归分析,筛选出与TIL相关的临床独立影响因素,在此基础上建立判别TIL程度的函数模型,以期为临床无创性评估TIL提供依据。2.对尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGA1）在IgAN中与临床病理指标的相关性进行分析,探讨其在IgAN患者TIL评估中的意义。3.采用磁珠分离系统联合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）探索IgAN无创性诊断模型及潜在的标志物。对象与方法:1.分析我院肾活检确诊的原发性IgAN患者1493例临床病理资料,在模型组筛选出与TIL相关的临床独立影响因素,建立判别TIL的函数模型,并在独立的验证组中检验其判别效率。2.应用酶联免疫法（ELISA）检测IgAN患者115例,非IgAN肾小球疾病对照组30例,健康对照组30例的尿NGAL水平,分析尿NGAL水平与IgAN患者临床及病理指标相关性。3.利用磁珠分离系统联合MALDI-TOF MS分析IgAN患者32例、非IgAN疾病对照组36例、健康对照组30例的尿液多肽谱,采用ClinProTools2.0软件主成分分析法和SVM算法建立鉴别诊断模型,对差异肽段经混合型串联傅立叶变换离子回旋共振质谱（nano-LC-Q-FT-ICR-MS）进行鉴定。结果:1.（1）1493例lgAN患者中,TIL无病变组12.8%;轻度组47.6%;中度组23.3%;重度组16.4%。（2）TIL与临床指标中年龄、血压、血肌酐、血尿酸、甘油三酯、胆固醇、24小时尿蛋白定量、尿NAG酶呈正相关,与血红蛋白、血白蛋白、尿渗透压呈负相关;与肾活检病理指标中球性硬化、节段损伤、新月体、系膜增殖、血管壁增厚、血管玻璃样变呈正相关。（3）建立函数模型1:在模型组经logistic回归分析,筛选出与有无TIL相关的临床独立影响因素,并建立判别有无TIL的函数模型,（?）TIL1=ea/（1+ea）,其中a=-4.0585+0.9335BP-0.0169Hb+1.4382Scr+0.0026Ua+0.0841ALB+0.2972UP+0.034Age。模型的ROC曲线下面积为0.766,优于各构成指标的ROC曲线下面积,选定界值为0.83,判别函数的灵敏度81.5%,特异度33.3%,准确率88.4%,以此模型在验证组进行验证,验证组的ROC曲线下面积为0.789,灵敏度81.0%,特异度31.2%,准确率87.6%。（4）建立函数模型2:在模型组经logistic回归分析,筛选出与TIL是否达中重度相关的临床独立影响因素,并建立判别TIL程度的函数模型,（?）TIL2=eb/（1+eb）,其中b=-2.0187+0.8482BP-0.0317Hb+1.9032Scr+0.0050Ua+0.2539UP。模型的ROC曲线下面积为0.855,优于各构成指标的ROC曲线下面积。选定界值为0.43,函数判别的灵敏度66%,特异度91.1%,准确率81%,以此模型在验证组进行验证,验证组的ROC曲线下面积为0.851,灵敏度63.6%,特异度91.0%,准确率80.0%。2.（1） IgAN组、非IgAN疾病对照组较健康对照组尿NGAL水平均明显升高,与健康对照组相比有统计学意义,P＜0.01。（2） IgAN组尿NGAL水平与多项临床病理指标明显相关。（3）影响NGAL水平的独立影响因素有血白蛋白水平,尿蛋白定量、尿NAG酶、尿渗透压,以及球性硬化、间质炎细胞浸润、间质纤维化、肾小管萎缩。（4）以尿NGAL水平超过正常对照组2个标准差视为显著增高,联合NAG酶对有无TIL进行评估,ROC曲线下面积为0.850,明显优于血肌酐的0.675,灵敏度83.3%,特异度73.3%,准确率81.2%。3.（1）采用IMAC-Cu2+磁珠分离系统联合MALDI-TOF MS提取多肽效果好,随机选取其中10个峰进行观察,日间-日内变异系数均在10%以内。（2） IgAN患者与健康对照、非IgAN疾病对照组的尿液多肽峰度表达存在明显差异,依据肽峰度表达的差异建立鉴别诊断模型,在两两比较中获得的模型鉴别IgAN与健康对照时灵敏度、特异度均为100%;鉴别IgAN与疾病对照时灵敏度为85.7%,特异度为76.5%。三组比较获得的模型在鉴别健康对照组准确率100%,鉴别IgAN组准确率71.4%,鉴别疾病对照组准确率76.9%。（3）鉴定得到了差异肽段m/z1913.14序列图SGSVIDQSRVLNLGPITR,经检索确定为uromodulin（尿调蛋白）的肽段。此肽段表达的峰度差异用于鉴别IgAN与健康对照组时ROC曲线下面积为0.998;在鉴别IgAN与疾病对照组时ROC曲线下面积为0.815。结论:1.IgAN患者中TIL的发生率较高,TIL与多项临床病理指标相关。通过对IgAN患者TIL发生的临床独立影响因素分析建立了有无TIL及TIL是否达中重度的判断函数模型,模型可重复性好,且有较好的ROC曲线下面积,对TIL病情判断的准确性分别为88.4%、81%。为临床上无创性判断IgAN患者TIL的程度、判断病情、随访疗效提供了参考。2.IgAN患者尿NGAL水平随临床病情的加重及病理指标积分的增加而明显升高,可以反映IgAN病情程度。在联合尿NGAL与尿NAG酶判别有无TIL时明显优于血肌酐及单纯的尿NGAL、尿NAG酶、尿渗透压等指标。3.采用IMAC-Cu2+磁珠分离系统联合MALDI-TOF MS分析人尿液多肽谱有较好的稳定性及可重复性。通过尿肽的峰度差异建立了IgAN与健康对照、疾病对照的鉴别诊断模型,有较好的灵敏度及特异度。m/z1913.14为uromodulin（尿调蛋白）的肽段,其特殊的强度范围可以作为诊断IgAN的一个可参考的无创性指标。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 正文
• 1.建立IgA肾病肾小管间质损伤的判别函数模型
• 1.1 引言
• 1.2 对象和方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 1.6 参考文献
• 2.尿NGAL检测在IgA肾病患者肾小管间质损伤评估中的意义
• 2.1 引言
• 2.2 对象与方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 2.6 参考文献
• 3.利用磁珠分离联合质谱探索IgA肾病无创性诊断模型及标志物
• 3.1 引言
• 3.2 对象和方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 3.6 参考文献
• 全文总结
• 文献综述:尿液蛋白质组学在肾小球疾病研究中的应用
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢