人noggin基因克隆及真核表达载体构建

论文摘要

[目的]Noggin基因是1992年California大学的Harland, R. M.和Smith, W. C.从非洲爪蟾的胚胎中分离出来的,由于将其mRNA注入爪蟾的胚胎可使其头部明显增大,因此得名。此后发现该基因在胚胎发育中有重要神经诱导作用,尤其是诱导外胚层的背侧发育。Noggin作为胚胎发育的重要基因,在进化过程中相当保守,在不同的物种间具有高度同源性。它涉及许多的发育过程,如神经管的形成和关节软骨的形成。作为一种内源性神经诱导信号,它的作用不仅局限于胚胎期,在成年哺乳动物CNS与外周神经系统也可检测到noggin基因的表达。此外,noggin基因亦是目前在体内与体外均被证实有神经诱导作用的神经诱导剂。其神经诱导功能主要是通过拮抗骨形成蛋白（bone morphogenetic protein-4, BMP4）的作用实现的。对于神经细胞的体外诱导分化研究和实验国内外均有广泛报道,但通过构建人Noggin基因载体并用其诱导分化的研究尚属领先。 T alpha-1微管蛋白启动子是一种神经细胞特异性启动子,有选择的在神经干细胞和不成熟的神经细胞内表达。为了进一步研究noggin基因的神经诱导功能和在细胞分化过程中的表达情况,本研究利用基因工程的方法构建pCS2+[Tα1]-Noggin载体。使我们可以很便利的研究noggin在活体细胞和组织的生物学特性（基因表达、信号转导、代谢活动等）,为下一步进行神经移植或基因治疗打下基础。 [方法]应用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）技术,从正常人胎脑组织中扩增出noggin cDNA,并将其连接到T载体上,经酶切鉴定无误后,送公司进行

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