慢乙肝患者外周血Th17细胞与疾病相关性的研究

论文摘要

1.研究背景及目的：乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的健康问题。全世界大约有3.5-4亿的慢性乙型肝炎病毒（CHB）患者,并且每年估计有1百万人死于由慢乙肝引起的肝硬化,肝衰竭和肝癌。目前已知,一旦HBV病毒感染人体,机体需要体液免疫和细胞免疫协同作用来清除病毒。其中,细胞介导的免疫反应,尤其是病毒特异性的CD4+和CD8+T细胞反应,是清除HBV感染的关键。Th17细胞作为最近新发现的一种CD4+的T辅助细胞,在自身免疫性疾病和介导宿主抵御各种感染性的疾病中能够发挥重要的作用。然而,Th17细胞在慢性HBV感染中的作用,尚不十分明确。本次研究的目的是对不同阶段HBV感染患者外周血Th17细胞的数量进行分析.研究其与肝功能损伤、HBV病毒复制以及细胞免疫耐受相关指标的相关性,并进一步探讨Th17细胞在干预慢性HBV感染的病理过程及预后中的作用。2.材料与方法：2.1研究对象本研究人群共133人,其中包括40例轻度慢乙肝患者,37例重度慢乙肝患者,20例急性乙肝（AHB）患者,同时选取健康成人36人（无特殊病史,体检无异常发现,近2个月无感染病史）作为对照（HBV未感染组）。乙肝患者的诊断及分期标准按照2000年9月西安第十次全国传染病与寄生虫病学会会议修订的《病毒性肝炎防治方案》。2.2实验方法2.2.1 Th17细胞的检测：采用流式细胞术细胞内因子染色法(流式细胞仪检测AHB组、CHB组和健康对照组人群外周血CD4+T细胞中Th17细胞的数量。2.2.2病毒学指标的检测：HBsAg, HBeAg, anti-HBs, anti-HBc, anti-HBe,以及HCV, HDV, HIV-1,和HIV-2使用时间荧光酶联免疫分析试剂盒完成（AXSYM System, Abbott, Wiesbaden, Germany）。2.2.3实时定量PCR检测RORγt-mRNA和HBV-DNA:采用美国ABI公司生产的7900型扩增仪,分别按照各自的试剂盒说明书步骤检测。2.2.4血清IL-10和IL-22检测：使用酶联免疫分析法（ELISA）根据试剂盒说明书操作（R&D公司）,实验结果使用伯乐680型酶标仪读取。2.2.5统计学分析：应用SPSS12.0软件对不用类型的组别进行Kruskal-Wallis H检验和Mann-whitney非参数U检验,使用Spearman发对Th17细胞和其他相关的参数进行相关性分析。3.结果：1、AHB组（95%CI 2.24～2.92）和重度CHB组（95%CI 2.20～2.64）患者外周血Th17细胞的数量与健康对照组（95%CI 1.78～2.25）和轻度CHB组（95%CI 1.69～2.19）比较明显增高。（P<0.05）2、与健康对照组相比较,AHB组和CHB组患者外周血PBMC中Th17细胞转录因子RORγt-mRNA的表达明显升高（P<0.05）。3、CHB患者外周血Th17细胞的数量与血清中ALT的浓度呈正相关（r=0.457,P=0.004）,但是与HBV-DNA的载量无相关性（r=-0.063,P=0.598）。4、CHB患者外周血Th17细胞的数量与血清中IL-10的含量呈负相关（r=-0.452,P<0.05）。血清IL-22的检测结果在各组之间无统计学差异。4.结论：1、我们的研究证实,我们的结果证实在SCHB和AHB患者外周血的Th17细胞分化异常,并且参与了疾病的发生发展和肝脏病理损伤的过程。2、本次研究的结果提示慢乙肝患者Th17细胞的分化异常但并没有影响HBV病毒的复制。3、慢乙肝患者Th17细胞的分化异常继而通过加重以IL-17及IL-10为代表的机体促炎/抑炎免疫失衡状态这种方式可能是肝脏发生病理损伤的重要机制之一。而对该平衡的干预和调节可能是干预慢乙肝重症化的发生发展及改善预后的新靶点。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• Abstracts
• 缩略词表
• 目次
• 引言
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 结果
• 1 不同阶段的乙肝患者外周血Th17细胞数量的比较
• 2 CHB患者不同ALT水平组之间外周血Th17细胞数量比较
• 3 CHB患者不同HBV-DNA载量组之间外周血Th17细胞数量比较
• 4 CHB患者ALT水平和HBV-DNA载量与外周血Th17细胞数量的关系
• 5 不同组HBV患者外周血PBMC中ROR γ t mRNA的表达情况
• 6 CHB患者血清中IL-10与外周血Th17细胞数量的关系
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简历及在学期间主持课题和发表论文