丙酮醛对VMP1、ZNF510在人牙周膜成纤维细胞中表达的影响

论文摘要

[目的]：为了进一步验证前期工作中通过基因芯片筛选得到的丙酮醛刺激人牙周膜成纤维细胞后差异性表达基因，本实验采用荧光定量PCR法进一步对丙酮醛刺激人牙周膜成纤维细胞后表达上调的基因VMP1和表达下调的基因ZNF510进行研究。[方法]：组织块培养法获取人牙周膜成纤维细胞，取3-4代的细胞用于实验。将细胞分为处理组和对照组，处理组加入含0.1mg／ml丙酮醛的培养液5ml作用于细胞密度为5×105／ml的人牙周膜成纤维细胞，对照组加入不含丙酮醛的培养液5ml。相同条件下培养24h后，用Trizol法分别提取处理组及对照组细胞的RNA,逆转录获取cDNA。利用荧光定量PCR法检测前期基因芯片筛选出的2个差异表达基因VMP1和ZNF510，验证基因芯片的杂交结果。[结果]：密度为5×105／ml的人牙周膜成纤维细胞用浓度为0.1mg／ml的丙酮醛刺激后，荧光定量PCR法检测发现：丙酮醛刺激人牙周膜成纤维细胞后，基因VMP1表达轻微上调，与基因芯片显著上调的结果存在一定差异。基因ZNF510表达下调，与基因芯片的结果基本一致。[结论]：丙酮醛刺激人牙周膜成纤维细胞后，应用荧光定量PCR法验证基因芯片检测发现的差异表达基因VMP1和ZNF510，基因VMP1表达轻微上调，与基因芯片显著上调的结果存在一定差异。基因ZNF510表达下调，与基因芯片的结果基本一致。实验在转录水平上进一步验证了基因芯片的研究结果。推测丙酮醛可能影响VMP1和ZNF510在人牙周膜成纤维细胞的表达，影响牙周膜成纤维细胞的生理功能，与牙周炎的发生发展存在一定联系。

论文目录

• 第一部分 丙酮醛对VMP1,ZNF510在人牙周膜成纤维细胞中表达的影响
• 摘要
• abstract
• 前言
• 1 丙酮醛研究概况
• 1.1 丙酮醛与细胞凋亡
• 1.2 丙酮醛与炎症
• 1.3 丙酮醛与牙周炎
• 2 人牙周膜成纤维细胞在牙周病研究中的作用
• 3 本实验相关的前期研究
• 4 VMP1、ZNF510的研究现状
• 4.1 VMP1的研究现状
• 4.2 ZNF510的研究现状
• 1 材料和方法
• 1.1 人牙周膜成纤维细胞培养
• 1.2 RNA的提取
• 1.3 RNA的逆转录及检测
• 1.4 荧光定量PCR
• 1.4.1 SYBRGreenI荧光定量法的原理、优点
• 1.4.2 SYBRGreenI荧光定量引物设计
• 1.4.3 SYBRGreenI荧光定量的实验体系
• 1.4.4 SYBRGreenI荧光定量的定量方法
• 1.4.5 SYBRGreenI荧光定量的数据分析方法
• 2.结果
• 2.1 人牙周膜成纤维细胞形态学观察
• 2.2 细胞鉴定结果
• 2.3 牙周膜成纤维细胞苔盼蓝染色
• 2.4 RNA的提取结果
• 2.5 逆转录及检测结果
• 2.6 荧光定量PCR结果
• 2.7 荧光定量结果表
• 3 讨论
• 3.1.关于HPDLFs的培养
• 3.2.基因芯片检测和荧光定量PCR检测结果差异性分析
• 3.3.VMP1、ZNF510差异表达的相关性分析
• 4 结论
• 5 工作小结及展望
• 参考文献
• 第二部分 综述 丙酮醛与细胞凋亡的研究进展
• 致谢