核酸疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠实验研究

论文摘要

目的1、研究hα-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6 -tetrahydropyridine, MPTP）慢性帕金森病（Parkinson’s disease, PD）小鼠的治疗效应。2、研究hα-syn核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6 -tetrahydropyridine, MPTP）慢性帕金森病（Parkinson’s disease, PD）小鼠后中脑黑质部炎性反应变化情况。方法将由本实验室成功构建的hα-syn核酸疫苗（PVAX1-hα-syn）利用Qiagen质粒提取试剂盒制备大剂量hα-syn核酸疫苗并纯化。24只MPTP慢性帕金森病小鼠随机分为3组:实验组、空质粒对照组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注PVAX1-hα-syn重组质粒,PVAX1空质粒和PBS各100ul,共免疫3次,每次间隔3周。末次免疫后2周,观察各组小鼠的行为学改变;在形态学上采用HE染色法观察黑质多巴胺细胞数量改变和小胶质细胞激活情况;采用SP免疫组织化学法检测α-突触核蛋白和黑质酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase, TH）的改变;采用SP免疫组织化学法检测中脑黑质部小胶质细胞激活情况和肿瘤坏死因子-α的表达改变。研究分析PVAX1-hα-syn诱导的免疫效应。结果1、行为学观察结果:PVAX1-hα-syn核酸疫苗免疫组小鼠的类帕金森病样症状与空质粒组和PBS对照组相比减轻,疫苗组小鼠爬杆时间较空质粒组及生理盐水对照组缩短,并有显著差异（p<0.01）。2、形态学检查结果:HE染色法染色后,疫苗组与空质粒组及生理盐水对照组比较,黑质区多巴胺能神经元细胞数量增多,且激活小胶质细胞略增多。3、SP免疫组织化学法结果:（1）与空质粒组及生理盐水对照组比较,疫苗组小鼠中脑黑质部α-syn阳性染色减少,积分光密度值（IOD）降低,小鼠中脑黑质α-syn表达较对照组减少约30%,且具有显著差异（p<0.01）;小鼠中脑黑质部TH免疫组织化学染色阳性细胞数增多,阳性细胞数（CPC）与空质粒组及生理盐水对照组比较,多巴胺能神经元数目增多了31%-39%,均有显著差异（p<0.01） ;而空质粒组与生理盐水对照组比较,黑质α-syn表达和多巴胺能神经元数目均无显著差异（p>0.05）。（2）疫苗组与空质粒组及生理盐水对照组比较,小鼠中脑黑质部CD11b及TNF-α免疫组织化学染色阳性细胞数增多,积分光密度值（IOD）增多,与空质粒组及生理盐水对照组比较均有显著差异（p<0.01）。结论1、hα-syn核酸疫苗具有较强的免疫原性,能对帕金森病小鼠产生较好的免疫治疗作用:减轻了MPTP诱导的C57BL/6慢性帕金森病小鼠出现的类帕金森病症状;中脑黑质部α-突触核蛋白表达减少,多巴胺能神经元数目增多。2、hα-syn核酸疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠具有一定的炎性副反应:中脑黑质部的小胶质细胞激活增多并分泌较多的炎性细胞因子,加重MPTP慢性帕金森病小鼠的炎性反应,需要在后续的进一步实验中对该疫苗进行优化,以减少其炎性副反应,并增加其对α-syn的中和清除作用。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：核酸疫苗免疫MPTP 慢性帕金森病小鼠实验研究
• 前言
• 第一部分 hα-syn 核酸疫苗免疫MPTP 慢性帕金森病小鼠治疗作用研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 hα-syn 核酸疫苗免疫 MPTP 慢性帕金森病小鼠后中脑黑质炎性反应改变研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 附图
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文