疏肝、健脾、疏肝健脾方对肝郁脾虚证模型动物外观表征及行为学的影响

论文摘要

方剂是由多味中药配伍而成、具有特定功用和主治的一种防疾治病的工具。其配伍与其所主病证病机或病理环节之间具有高度的相关性或针对性,即“方证相关”。通常针对一个特定病证可能会有数个方剂起作用,但疗效存在差异,或同一方剂作用于不同病证会呈现不同的治疗效果。“方证相关”是中医辨证论治原理的核心,也是方剂学学理的重要逻辑基础。研究方与证之间的关系对揭示辨证论治原理具有重要的理论与实践意义。本课题采用慢性束缚+饮食失节+过度疲劳法复制出肝郁脾虚证动物模型,以模型动物外观行为作切入点,比较观察具有疏肝、健脾、疏肝健脾不同功效的柴胡疏肝散、四君子汤、柴疏四君汤对模型大鼠外观行为变化作用的异同,并探查模型的中枢递质及生化物的变化和三方对其变化的影响。论文包括文献综述和实验研究两部分。文献综述对肝郁脾虚证及柴胡疏肝散、四君子汤、柴疏四君汤三方的临床与实验研究概况进行了综述。实验研究观察了肝郁脾虚证大鼠模型外观行为表征及其中枢神经递质及有关生化物的变化和柴胡疏肝散、四君子汤、柴疏四君汤三方对该模型的相关作用。研究方法：将大鼠随机分为正常对照组、肝郁脾虚模型组（以下简称模型组）、柴疏四君汤组、四君子汤组、柴胡疏肝散组共5组,每组12只。后4组大鼠于每天8：00 am置于束缚器中限制3h,2：00pm置于盛有温水（22±1℃）的大塑料桶中游泳10 min,隔日喂食（隔日禁食,隔日足量给食）,连续4周；正常对照组不施加任何刺激,自然饲养。于造模第15天,中药各组大鼠分别给予柴疏四君汤4.27g／kg、四君子汤4.53g／kg、柴胡疏肝散4.2g／kg灌胃,每天1次；模型组与对照组分别给予等量蒸馏水,连续14天。并于第7d、14d、21d、28d,分早、中、晚三个时间点观察并记录各组大鼠的行为状态、活跃程度、情绪反应、皮肤毛发、饮食状态、睡眠状态、大便状态等方面的变化；于每周第7天2：00-2：30pm测定各组大鼠的体重；于第14d、28d通过旷场实验记录大鼠5min内爬行格数、直立次数、修饰时间及中央格停留时间。于第29天8：00am断头处死,在冰盘上迅速剥离大鼠海马、下丘脑和脑干,置于液氮罐中保存,待测。采用高效液相色谱荧光法测定海马组织中Asp、Glu、GABA、Gly、Tau;采用放射免疫法测定下丘脑组织中cAMP、PGE2;采用酶联免疫法测定脑干组织中P450酶的活性及含量。统计学方法：所得数据均以χ±S表示,采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行检验后,多组间比较采用Student Newman Keuls Test检验。全部数据采用SPSS 13.0 for windows软件统计处理。研究结果：1.肝郁脾虚证模型大鼠外观表征的变化及相关方药的作用：造模1周后,模型组、柴疏四君汤组、四君子汤组、柴胡疏肝散组大鼠行为活动、情绪反应、皮肤毛发、饮食、睡眠与大便状态等均未有明显变化。模型组大鼠造模2周后即表现出活动减少、活跃程度减弱、情绪易怒、饮食减少、皮毛不顺泽、易醒、便干等；造模3周后开始出现动作迟缓、情绪不稳、饮食减少、皮毛不泽、倦卧、便溏；造模4周后,则出现明显的活动减少、扎堆甚至倦卧多睡,情绪由开始的易激惹状态转为情绪低落、争斗减少,饮食减少,皮毛枯乱,大便稀溏等。与模型组比较,3个中药组大鼠在给药1周后（造模3周后）,活动增加,情绪趋于稳定,饮食有增,皮毛、睡眠与大便状态均见不同程度好转。给药2周后（造模4周后）,柴疏四君汤组大鼠行为活动明显增加、反应敏捷、皮毛接近顺整、饮食增加、睡眠深浅适度、大便成形；四君子汤组大鼠在皮毛、饮食、睡眠与大便状态改善方面明显；柴胡疏肝散组大鼠在行为状态、活跃程度、情绪反应等方面均见明显好转。2.肝郁脾虚证模型大鼠体重的变化及相关方药的作用：实验期间,正常组大鼠体重明显增加,模型组与3个给药组大鼠体重增加较为缓慢,其中模型组、柴疏四君汤组和四君子汤组大鼠在第1周末体重出现负增长；模型组与柴胡疏肝散组大鼠在第4周末体重出现下降趋势。与正常组比较,模型组与柴疏四君汤组、四君子汤组、柴胡疏肝散组大鼠在第1w、2w、3w、4w末的体重均明显降低,差异具有显著性意义（P<0.05）。与模型组比较,3个给药组大鼠体重变化无显著性差异（P>0.05）；且3个给药组间大鼠体重变化无明显差异（P>0.05）。3.肝郁脾虚证模型大鼠自主行为的变化及相关方药的作用：与正常组比较,造模第14天时的模型组与3个中药组大鼠的爬行格数明显增加,差异具有显著性意义（P<0.01或P<0.05）；模型组、柴疏四君汤组大鼠直立次数增加,差异具有显著性意义（P<O.05）；模型组、四君子汤组大鼠修饰时间和中央格停留时间均延长,其中修饰时间差异具有显著性意义（P<0.05）。给药2周后（造模第28天）与正常组比较,模型组、四君子汤组与柴胡疏肝散组大鼠爬行格数增加,差异均有显著性意义（P<0.05）,柴疏四君汤组大鼠爬行格数接近正常水平（P>0.05）；模型组与四君子汤组大鼠直立次数增加,差异有显著性意义（P<0.05）,柴疏四君汤组与柴胡疏肝散组大鼠增加不明显（P>0.05）；模型组与3个中药组大鼠修饰时间、中央格停留时间均有延长,但差异无显著性意义（P>0.05）。与模型组比较,3个中药组大鼠的爬行格数和直立次数均有不同程度的降低,其中柴疏四君汤组爬行格数降低明显,差异有显著性意义（P<0.05）4.肝郁脾虚证模型大鼠中枢神经生化指标的变化及相关方药的作用：（1）与正常组比较,模型组大鼠海马组织中Asp（天冬氨酸）的含量呈升高趋势,Glu（谷氨酸）、GABA（Y-氨基丁酸）、Gly（甘氨酸）、Tau（牛磺酸）的含量呈下降趋势,但差异均无显著性意义（P>0.05）；下丘脑组织中PGE2和cAMP的变化均无显著性差异（P>0.05）；脑干P450酶活性与酶含量的变化均无显著性差异（P>0.05）。（2）与模型组比较,3个中药组大鼠的上述指标均无明显变化（P>0.05）。研究结论：采用慢性束缚+饮食失节+过度疲劳法制备的肝郁脾虚证模型大鼠表现出活动减少、扎堆多睡、情绪低落、争斗减少、饮食减少,皮毛枯乱,大便稀溏、体重减轻等,同时伴有自主活动增强的行为特征。经柴疏四君汤、四君子汤、柴胡疏肝散治疗2周后,可使模型大鼠外观表征呈现不同程度的改善,并对自主活动具有一定调节作用,其中以柴疏四君汤的干预效果最佳,柴胡疏肝散和四君子汤在改善模型大鼠外观表征中的行为状态、情绪反应和皮肤毛发、睡眠状态等方面各有侧重。结果表明,该模型具有类似于肝郁脾虚证的中医证候的一些特点,柴疏四君汤与该证模型具有更高的关联性,符合“疏肝健脾与肝郁脾虚证相应”的中医证治经验。本研究为肝郁脾虚证模型的中医证候学评价提供一定的研究思路,为理解“方证相关”的内涵及认识相关方剂的功用提供了一定的现代依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 上篇:文献综述
• 综述一 肝郁脾虚证的临床与实验研究
• 一、肝郁脾虚证的临床研究
• 二、肝郁脾虚证的实验研究
• 参考文献
• 综述二 柴胡疏肝散、四君子汤、柴疏四君汤临床与实验研究概况
• 一、柴胡疏肝散的研究概况
• 二、四君子汤的研究概况
• 三、柴疏四君汤的研究概况
• 参考文献
• 下篇:实验研究
• 肝郁脾虚证模型大鼠外观行为学的变化及相关方剂的作用
• 一 前言
• 二 课题设计
• 三 研究内容
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历