奶牛布氏杆菌的分离鉴定、血清学检测方法比较与流行病学调查

论文摘要

为查明全国部分省份地区奶牛和羊布氏杆菌病感染情况和流行特点,本研究对8个不同的省区进行了流行病学调查,采集奶牛样品2396份及羊血清2282份,采用RBT、SAT、iELISA、cELISA、MRT及奶样iELISA6种不同的血清学方法进行检测。结果表明在奶牛布病调查的8个省区中,感染率呈现出明显的区域不均衡性,血清平均阳性率为3.20%;奶样平均阳性率为14.23%,各调查点奶样的布病阳性率比血清的阳性率高出4倍以上;在羊布病调查的4个省区中,羊布病平均阳性率为1.16%,显著低于奶牛阳性率,这可能与奶牛饲养周期长、淘汰率低有关。对出现较多流产、早产、死胎、胎盘滞留等疑似布氏杆菌患牛的两个奶牛养殖基地的奶牛进行了布氏杆菌病血清学检测,同时为了查明引起奶牛布病的菌种及其生物型,对两奶牛场的600头奶牛进行了血清学检测,采集检测为阳性的奶牛的奶样120份,进行病原分离与鉴定。结果分离到细菌17株,经革兰氏染色、柯兹罗夫斯基鉴别染色和PCR鉴定,17株分离菌株均为牛种布氏杆菌。为了筛选出敏感性和特异性更好,更方便快捷的血清学检测方法,本文对已知感染状况的107头奶牛,同时用RBT、SAT、iELISA和cELISA四种方法进行检测,对检测结果进行比较分析,发现四种方法中,在敏感性方面,最低的是SAT,最高的是cELISA,RBT与iELISA的相同;特异性方面,cELISA高于SAT高于iELISA高于RBT;用时方面,SAT用时最长,需要过夜,iELISA最快,10分钟即可检测90个样品。结果表明iELISA和cELISA敏感性和特异性均高于RBT和SAT,并且操作方便快捷,具有血清学检测所具备的各项要求,在大面积检测时可作为国标检测方法的补充试验。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述
• 1 布氏杆菌病的概述
• 1.1 病原学
• 1.1.1 形态及染色特性
• 1.1.2 培养及生化特性
• 1.1.3 抵抗力
• 1.2 流行病学
• 1.2.1 牛种布氏杆菌及牛布病
• 1.2.2 羊种布氏杆菌及绵羊、山羊布病
• 1.2.3 猪种布氏杆菌及猪布病
• 1.2.4 绵羊种布氏杆菌及绵羊附睾炎
• 1.2.5 犬种布氏杆菌及犬布病
• 1.2.6 海洋种布氏杆菌
• 1.3 发病机理
• 1.4 病理变化
• 1.5 临床症状
• 1.6 诊断
• 1.7 防制
• 2 布氏杆菌病发展历史
• 3 布氏杆菌病疫情及发展趋势
• 3.1 世界布病疫情
• 3.2 国内布病疫情
• 3.3 布氏杆菌病发展趋势
• 4 布氏杆菌病诊断方法的发展
• 4.1 布病的病原学诊断
• 4.1.1 DNA 同源性检测
• 4.1.2 DNA 限制性内切酶图谱分析
• 4.1.3 PCR 扩增
• 4.1.4 核酸探针检测
• 4.2 免疫学诊断
• 4.2.1 凝集试验
• 4.2.2 补体结合试验（CFT）
• 4.2.3 乳环试验（MRT）
• 4.2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 4.2.5 荧光偏振试验（FPA）
• 4.2.6 其他血清学诊断技术
• 第二部分 研究内容
• 第一章 华东某奶牛场和新疆某奶牛场布氏杆菌的分离鉴定
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 样品
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 血清学检测
• 1.1.4 分离培养
• 1.1.5 染色鉴定
• 1.1.6 PCR 鉴定
• 1.2 结果
• 1.2.1 血清学检测
• 1.2.2 细菌分离培养
• 1.2.3 染色鉴定
• 1.2.4 PCR 鉴定
• 1.3 讨论
• 第二章 布氏杆菌血清学国标检测方法与OIE 检测方法的比较
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 样品
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三章 部分省市布氏杆菌病流行病学调查
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 样品
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 奶牛样品检测结果
• 3.2.2 羊血清检测结果
• 3.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录 溶液与试剂配方
• 致谢
• 作者简历