论文摘要
目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol, Res)对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法:采用四唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色实验检测胶质瘤U87细胞经不同浓度Res作用24h、48h、72h后细胞活力的变化,测定Res无毒性浓度,确定后续实验中Res实验浓度;细胞划痕实验和transwell侵袭实验,以检测Res对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析Res对细胞基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9活性的改变;westernblotting检测Res对细胞内ERK1/2、p-ERK1/2、AKT-1、p-AKT-1、p65和MMPs的表达影响;免疫细胞化学检测U87细胞经Res处理后p65的表达和核转位情况。结果:MTT比色法显示,高于40μM浓度的Res对U87细胞活力具有明显的抑制作用。与对照组相比,40μM浓度Res能明显抑制U87细胞体外迁移和侵袭能力(p<0.05)。Res处理24h和48h后,细胞划痕宽度明显较宽(p<0.05),表明经过Res处理后U87细胞体外迁移能力下降。Res处理24h和48h后,通过基质胶的U87细胞数量明显减少(p<0.05),表明该浓度Res能够抑制胶质瘤U87细胞的体外侵袭能力。明胶酶谱实验显示,经40μMRes处理后, U87细胞MMP-2活性明显降低(p<0.05)。Western bloting证实Res能够明显抑制MMP-2的蛋白表达水平(p<0.05)。细胞免疫化学结果亦显示,经40μM Res处理后,p65从胞浆向胞核的转位明显减少,另外,应用NF-kB抑制剂SN50处理U87细胞后,MMP-2表达和活性均下降。Western blotting实验表明,经40μM Res处理后, U87细胞p-ERK1/2和p-AKT-1(s473)的蛋白水平明显降低。结论:40μM Res能够明显抑制胶质瘤U87细胞的体外迁移和侵袭能力,其机制可能是Res抑制U87细胞中ERK和AKT信号通路,进而抑制NF-kB的核转位,从而降低了MMP-2表达和活性。
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